Question

【题目】根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性内切酶主要来源于生物，切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 。

（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即

（3）反转录作用的模板是 ，若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术，该技术所需要的条件有模板DNA、引物、 、原料和能量等。

（4）基因工程中除质粒外， 和动植物病毒也可作为运载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而是应该用 进行处理。

Answer 1

【答案】

（1）原核黏性末端和平末端

（2）E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶

（3）mRNAPCRTaq酶（热稳定DNA聚合酶）

（4）入噬菌体的衍生物

（5）Ca2+

【解析】（1）经限制性核酸内切酶切割后能形成两种类型的末端，即平末端和黏性末端．（2））DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶．这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低．（3）反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增．；（4）基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．

（5）当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca2+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．

生物种类	植物细胞	动物细胞	微生物细胞
常用方法	农杆菌转化法	显微注射技术	Ca2+处理法
受体细胞	体细胞	受精卵	原核细胞
转化过程	将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达	将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物	Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子