【题目】人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与血纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该突变基因，可制造出性能优异的t-PA突变蛋白，该过程称为蛋白质工程。
（1）已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的编码序列（即模板链的互补链序列）为TGT，而丝氨酸的密码子为UCU，因此突变基因编码该氨基酸的编码序列应设计为______。
（2）上述突变基因（即目的基因）宜采用______方法获得。
（3）若获得的t-PA突变基因如图1所示，那么质粒pCLY11需用限制酶______和______切开，才能与t-PA突变基因高效连接。
（4）将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中，含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞应具有的表型是______。
A．新霉素抗性且呈蓝色 B．新霉素敏感且呈蓝色
C．新霉素抗性且呈白色 D．新霉素敏感且呈白色
（5）为了收获大肠杆菌表达的t-PA突变蛋白，第一步可采用常规的酶分离提纯方法。这种方法的基本操作顺序是______。
A．破碎→过滤→沉淀→层析B．过滤→层析→破碎→沉淀
C．层析→沉淀→过滤→破碎 D．沉淀→破碎→层析→过滤
（6）层析是蛋白质或酶分离提纯的重要步骤。在图2所示的层析装置中，层析柱内装填了特定的细小固体颗粒（称为层析介质），待分离的蛋白质或酶混合溶液流进流出层析柱，便可将目标蛋白与杂蛋白高效分离。试根据题干信息判断，为了高效分离t-PA突变蛋白，层析介质表面事先应交联或固定______。
【答案】TCT 化学方法人工合成 XmaI BglII C A 血纤维蛋白
【解析】
1、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）
2、蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）
（1）因为制造性能优异的t-PA突变蛋白，是将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的编码序列（即模板链的互补链序列）为TGT，而丝氨酸的密码子为UCU，因此突变基因编码该氨基酸的编码序列应设计为TCT。
（2）上述突变基因（即目的基因）由于序列较短，并且序列已知，所以宜采用化学方法人工合成。
（3）由于目的基因的两端的碱基序列分别是CCGG、CTAG，所以应用XmaI和BglII两种限制酶切割，以便于把目的基因连接到质粒pCLY11上。
（4）由图1可知，将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中，由于限制酶切割质粒破坏了mlacZ基因，所以含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞应具有的表型是新霉素抗性且呈白色。
（5）为了收获大肠杆菌表达的t-PA突变蛋白，第一步可采用常规的酶分离提纯方法。这种方法的基本操作顺序是破碎→过滤→沉淀→层析。
（6）为了高效分离t-PA突变蛋白，层析介质表面事先应交联或固定血纤维蛋白，这样便可将目标蛋白与杂蛋白高效分离
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【题目】高等植物生命过程中影响呼吸作用的因素有多种，据图回答下列相关问题：
（1）在测定呼吸作用相对速率时，通常需要避光条件，其原因是___________。由图可知，25℃条件下影响呼吸作用相对速率的主要因素是___________。
（2）能够较长时间维持较快呼吸速率的温度称为适宜温度。若该图表示豌豆幼苗的呼吸速率随时间变化的曲线，则豌豆幼苗呼吸作用的适宜温度是___________；温度为40℃时，豌豆幼苗呼吸速率随时间变化的特点是___________________。
（3）呼吸作用反应物也会影响呼吸作用，其影响大小通常用单位时间内释放CO2与吸收的比率来表示。若反应物为丙酮酸时释放CO2与吸收O2的比值为X，反应物为葡萄糖时的比值为Y，根据有氧呼吸有关过程，比较X与Y的大小关系是：X___________（填“大于”“等于”或“小于”）Y。
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【题目】某生物兴趣小组用模型模拟的 T2 噬菌体侵染细菌实验的过程如图，下列说法正确的是
A. T2噬菌体侵染细菌过程的顺序为 d→c→a→e→b
B. d→a 过程所需原料由噬菌体和细菌共同提供
C. 35S标记组中保温时间过长或过短不影响实验结果
D. 32P标记组所释放的子代噬菌体均能检查到放射性
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【题目】科研人员为研究枇杷植株在不同天气条件下的光合特征，对其净光合速率和气孔导度进行了测定，结果如下。下列有关叙述不正确的是( )
A. 阴天时净光合速率下降的时间与气孔导度的下降时间不一致
B. 晴天时出现“午休”现象与气孔关闭引起的CO2浓度下降有关
C. 两种条件下枇杷净光合速率峰值出现的早晚均与光照强度无关
D. 实验结果显示枇杷植株适合种植在光线弱的荫蔽环境中
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【题目】对下列生物学实验进行设计、分析和预测。
（1）在“探究2,4-D对插枝生根的作用”的实验中，有甲、乙、丙三组烧杯，甲和乙分别装不同浓度的2,4-D溶液（甲浓度<乙浓度），丙中为蒸馏水，以枝条上根的总长度为观测指标，预测实验结果，将预测结果用根的生长曲线图表示出来（说明：无法从结果得出2,4-D的双重性作用）。_________
（2）为研究垂体对机体生长发育的作用，以幼龄大鼠为研究对象，发现切除垂体的大鼠的生长发育状况不如对照组，原因是垂体分泌的_________减少，同时测得实验组下丘脑分泌的相关激素含量_________________。欲取上述正常实验大鼠在不分组的情况下，验证促甲状腺激素通过甲状腺对下丘脑进行反馈调节，请在其测定结果的基础上设计实验思路。
①对正常实验大鼠注射____, 一段时间后_________。
②待检测指标恢复后，再将正常实验大鼠进行_________处理，实施同上操作，记录并统计实验数据。
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【题目】在制作DNA双螺旋结构模型时，如图为两个脱氧核苷酸的模型。其中圆代表磷酸，下列说法正确的是（ ）
A.方形可能代表A、T、C、U四种含氮碱基
B.两个圆可用别针（代表共价键）连接，以形成DNA的侧链
C.别针（代表共价键）应连接在一个核苷酸的五边形和另一个核苷酸的圆上
D.如果两个脱氧核苷酸分别位于链的两侧，两个模型方向相同
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【题目】按照图示1→2→3→4进行实验，可验证朊病毒是蛋白质侵染因子。朊病毒是一种只含蛋白质而不含核酸的病原微生物，题中所用牛脑组织细胞为无任何标记的活体细胞。
（1）本实验采用的方法是____________。
（2）从理论上讲，离心后上清液中_____________（填“能大量”或“几乎不能”）检测到32P，沉淀物中_____________（填“能大量”或“几乎不能”）检测到32P，出现上述结果的原因是___________________。
（3）如果添加试管5，从试管2中提取朊病毒后先加入试管5，同时添加35S标记的（ NH4）235SO4，连续培养一段时间后，再提取朊病毒加入试管3，培养适宜时间后离心，检测放射性应主要位于_______________中，少量位于__________中，原因是____________________________________________。
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【题目】在光合作用中，RuBP羧化酶能催化
，下列分析正确的是（ ）
A.叶肉细胞内RuBP羧化酶分布在叶绿体基质中
B.RuBP羧化酶只有在有氧条件下才能发挥其催化作用
C.提取的RuBP羧化酶应在最适温度条件下保存，以保持其最高活性
D.叶肉细胞内RuBP羧化酶只有在黑暗条件下才能发挥其催化作用
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