Question

13．图是将基因A导入大肠杆菌细胞内制备“工程菌”的示意图．请回答问题：

（1）可用基因A的mRNA为模板，通过逆转录酶的作用下合成双链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，从而获得基因A．
（2）对获得的基因A通常采用PCR（多聚酶链式反应）技术来扩增其数量，在该过程所用酶最大的特点是耐高温．
（3）由基因A和载体B拼接形成基因表达载体C，C的组成包括基因A、启动子、终止子和标记基因．
（4）将基因A导入大肠杆菌D之前，常用Ca²⁺处理大肠杆菌以便吸收重组DNA分子．可以通过基因表达载体上的标记基因来筛选含有基因A的受体细胞，从而获得工程菌．

Answer 1

分析 分析题图：图示是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图，其中A为目的基因，B为运载体（质粒），C为重组质粒，D为受体细胞．

解答 解：（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，通过逆转录过程合成单链DNA，再在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的脱氧核苷酸序列，再通过人工合成（化学）方法合成所需基因．
（2）PCR技术可在体外扩增目的基因，该过程是在高温环境中进行的，因此需要热稳定DNA聚合酶．
（3）由A和载体B拼接形成的C称为基因表达载体，基因表达载体的组成包括启动子、标记基因、目的基因和终止子等．
（4）将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca²⁺处理，使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子，这样可以提高受体细胞的转化率．表达载体上的标记基因用于筛选含有基因A的受体细胞，从而获得工程菌．
故答案为：
（1）逆转录    DNA聚合    
（2）PCR（多聚酶链式反应） 耐高温    
（3）启动子  终止子   
（4）Ca²⁺  标记基因

点评 本题结合制备“工程菌”的示意图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．