【题目】华蟾素注射液是将蟾蜍的全皮阴干后，提炼而成的中药复方制剂，是我国经典抗肿瘤药物。研究人员为探寻华蟾素注射液抗肝癌HepG-2细胞的作用机理，进行了一系列实验。请根据题中信息回答下列问题。
Ⅰ.肝癌HepG-2细胞的培养：
（1）培养肝癌HepG-2细胞时，在培养基中加入适量的__________以补充合成培养基中缺乏的物质，为防止培养过程发生污染要加入______。此外，每48h更换1次培养液，目的是__________。同时还要提供适宜的温度、______、氧气和二氧化碳等环境条件。
Ⅱ.探究华蟾素药效作用机理的实验：
（2）用不同浓度的华蟾素注射液分别处理HepG-2细胞12h、24h和48h，测定华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响，结果如下图。
由图甲可知，华蟾素能有效地______肝癌HepG-2细胞增殖，且与______呈正相关。图乙的结果进一步表明，华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在______________。
（3）DNA拓扑异构酶Ⅱ（简称TopoⅡ）为真核生物所必需，在DNA复制、转录、重组及形成正确的染色体结构、染色体分离、浓缩等方面发挥重要作用，TopoⅡ在肿瘤细胞中含量明显高于正常细胞。华蟾素注射液处理HepG-2细胞48h后，采用RT-PCR技术检测TopoⅡ基因的表达情况，结果如图丙。
①RT-PCR即逆转录-聚合酶链反应。其主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段_______作为引物，在________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行_________。
②由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是______。
【答案】 血清（血浆） 抗生素 防止代谢物积累对细胞自身造成危害（补充细胞所需营养物质） pH 抑制 作用时间和浓度 将癌细胞阻滞在S期 与TopoⅡmRNA互补的单链DNA 逆转录 PCR扩增 抑制TopoⅡ基因的转录/表达，最终导致TopoⅡ含量降低
【解析】【试题分析】
1．在动物细胞培养时，所需营养物质有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。将这些营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此，在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
2．逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
（1）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量动物血清，以补充合成培养基中缺乏的物质；为防止培养过程发生污染要加入一定量的抗生素；定期更换培养液的目的是清除代谢产物，防止代谢物积累对细胞自身造成危害（补充细胞所需营养物质）；同时还要提供适宜的温度、pH、氧气和二氧化碳等环境条件。
（2）分析图甲可知，随着华蟾素注射液浓度的增加和作用时间的延长，对HepG-2细胞的抑制率增大，说明华蟾素能有效地抑制肝癌HepG-2细胞增殖，且与作用时间和浓度呈正相关；由图乙可知，随着华蟾素注射液浓度的增加，肝癌HepG-2细胞S期细胞细胞比例增大，表明华蟾素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响体现在将癌细胞阻滞在S期。
（3）①RT-PCR主要原理是：提取HepG-2细胞中的总RNA， 以一段与TopoⅡmRNA互补的单链DNA作为引物，在逆转录酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增。
由图丙可知，华蟾素注射液在基因水平上影响肝癌HepG-2细胞的机理是抑制TopoⅡ基因的转录/表达，最终导致TopoⅡ含量降低。
桃李文化快乐暑假武汉出版社系列答案科目：高中生物 来源： 题型：
【题目】在“观察DNA、RNA在细胞中分布”的实验中，正确的实验步骤是
A.染色→制片→水解→冲洗→观察 B.制片→水解→冲洗→染色→观察
C.制片→染色→水解→冲洗→观察 D.水解→制片→冲洗→染色→观察
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【题目】下图表示抗人体胃癌细胞的单克隆抗体的制备过程，下列有关叙述错误的是
A. 图中甲可能是人体胃癌细胞的特异性抗原
B. 用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长
C. 丙、丁分别表示杂交瘤细胞和能分泌抗胃癌抗体的杂交瘤细胞
D. 丁的大规模培养可以在培养基中进行，也可以在小鼠腹腔内进行
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【题目】研究人员进行了含有不同钠离子浓度的细胞外液(细胞外液渗透压相同、钾离子浓度相同)对离体枪乌贼神经纤维电位变化影响的实验，结果如图。下列相关叙述错误的是( )
A. 在未受刺激时，枪乌贼神经细胞膜对K＋的通透性大，对Na＋的通透性小，膜内的K＋扩散到膜外，而膜外的Na＋不能扩散进来
B. 细胞外液中钠离子浓度可以影响动作电位的幅度和速率
C. 若持续降低细胞外液中钠离子的浓度，则神经纤维可能会接受适宜刺激后无法产生动作电位
D. 在神经纤维产生兴奋、传导兴奋的过程中，Na＋进出细胞均不消耗ATP
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【题目】稳态的生理意义是（ ）
A.使体温维持相对恒定
B.使体液的PH保持相对稳定
C.使内环境的渗透压处于相对平衡
D.是机体进行正常生命活动的必要条件
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【题目】在一个新鲜萝卜中挖一凹槽，在凹槽中放进浓盐水，过一段时间，结果是（ ）
A.萝卜变硬，凹槽中水分减少
B.萝卜变硬，凹槽中水分增多
C.萝卜变软，凹槽中水分减少
D.萝卜变软，凹槽中水分增多
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【题目】核基因编码的蛋白质在细胞内的运输取决于自身氨基酸序列中是否包含了信号序列(引导蛋白质定向转移)及信息序列的差异。据图分析下列说法错误的是( )
A. ①过程形成多聚核糖体，加快了多肽链合成的效率
B. ③过程输出的蛋白质中信号序列被切除属于对蛋白质的加工
C. 无信号序列参与的蛋白质留在了细胞质基质
D. 蛋白质经⑥⑦过程进入相应结构时无选择性
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【题目】下列有关食物链和食物网的说法，正确的是
A．每种动物只占据某一特定的营养级
B．生态系统中能量流动沿着食物链和食物网进行
C．沿着食物链的方向，营养级越高的生物体型就越大
D．在一条食物链中，次级消费者的同化量大于初级消费者
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【题目】为研究白藜芦醇(简称Res)对胰腺癌细胞的增殖的抑制作用会随着Res浓度和作用时间的增大而加强。请根据以下提供的实验材料和用具，提出实验思路，预测实验结果并进行分析。
材料和用具：培养瓶若干个、用DMSO溶液配制的浓度分别为15 μmol·L－1、30 μmol·L－1、60 μmol·L－1的Res溶液，DMSO溶液，胰腺癌细胞悬液，细胞培养液，血细胞计数板，显微镜等。(要求与说明：DMSO溶液的浓度适宜，对胰腺癌细胞的增殖无影响；实验开始时和每隔24小时对胰腺癌细胞进行计数，至少进行4次细胞计数；细胞计数的具体操作过程不作要求；实验条件适宜)
请回答：
(1)实验思路：
①__________________________________________________________；
②__________________________________________________________________；
③_________________________________________________________________；
④________________________________________________________________________。
(2)预测实验结果(在以下坐标系中，绘制胰腺癌细胞数量变化曲线)：
__________________
(3)分析与讨论：
①某研究小组为了增加对胰腺癌细胞数的估算方法，还使用了比浊计对各组的________进行了测定。
②胰腺癌恶性度高，病程短，一般出现症状时已属晚期，并很快发生转移。癌细胞容易在组织间转移的原因是__________________________。
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