Question

（10分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶___________和限制酶___________分别对___________（2分）和质粒进行切割。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有______作为标记基因。

（3）研究人员通常采用___________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用___________（2分）技术。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___________和___________过程。

 

Answer 1

【答案】

（1）PstⅠ   SmaⅠ　含鱼抗冻蛋白基因的DNA（2分，只答鱼的抗冻蛋白基因不给分） （2）抗氨苄青霉素基因（ampr）　（3）农杆菌转化（或基因枪法、花粉管通道法等）　抗原—抗体杂交（2分）　（4）脱分化   再分化

【解析】（1）为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，应选用双酶切，即选择PstⅠ和SmaⅠ切割。

（2）ampr为抗氨苄青霉素基因，属于标记基因。

（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法。检测目的基因是否翻译形成蛋白质常用抗原－抗体杂交法。

（4）植物组织培养包括脱分化和再分化过程。