Question

1．根据基因工程的有关知识，回答下列问题
（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有平末端和黏性末端．
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
AATT C…G
G…CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割．两种酶切割产生的末端必须相同．
（3）如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，则图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是①④②③，其中有磷酸二酯键形成的过程是②④（填序号）．
（4）反转录过程的模板是mRNA（或RNA），产物是cDNA（或DNA）．若要在体外获得大量反转录产物，常采用PCR（聚合酶链式反应）技术，其原理是DNA复制．
（5）将目的基因导入受体细胞：
动物基因工程受体细胞一般是受精卵，导入方法常用显微注射法．
植物基因工程受体细胞一般是体细胞，导入方法常用农杆菌转化法．
把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有平末端和黏性末端．
（2）DNA连接酶只能连接具有相同末端的DNA片段，因此两种酶切割产生的末端必须相同，DNA连接酶才能将它们连接起来．
（3）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端，因此作用于①；DNA聚合酶用于DNA分子的复制，能在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来，因此作用于④；DNA连接酶能在具有相同碱基末端的两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，因此作用于②；解旋酶能够将DNA分子的双螺旋解开，故作用于③．其中DNA连接酶和DNA聚合酶催化形成磷酸二酯键，而限制性核酸内切酶催化磷酸二酯键断裂，解旋酶作用于氢键．
（4）反转录过程的模板是mRNA（或RNA），产物是cDNA（或DNA）．PCR（聚合酶链式反应） 技术可在体外大量扩增目的基因，其原理是DNA复制．
（5）将目的基因导入受体细胞：
动物基因工程受体细胞一般是受精卵，导入方法常用显微注射法．
植物基因工程受体细胞一般是 体细胞，导入方法常用农杆菌转化法．
把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用Ca²⁺处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为感受态．
故答案为：
（1）平末端　黏性末端
（2）相同
（3）①④②③②④
（4）mRNA（或RNA）　cDNA（或DNA）　PCR（聚合酶链式反应）  DNA复制
（5）受精卵   显微注射法    体细胞   农杆菌转化法  Ca²⁺      感受

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及其作用；识记基因工程的操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．