Question

2．最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并将其分泌到尿液中．这是继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，在膀胱生物反应器研究上另一进展．
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用的方法是显微注射法．所使用到仪器是显微操作仪．
（2）在基因工程中，将目的基因与运载体结合时，必须用同种限制酶和DNA连接酶．常用的运载体有质粒、动植物病毒、噬菌体的衍生物等，而作为运载体必须具备相应的条件，例如应具有标记基因以便进行筛选．进行基因转移时，通常要将外源基因转入动物的受精卵（或早期胚胎）中，原因是受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞表达．
（3）通常采用DNA分子杂交（核酸探针）技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组中．
（4）在研究膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的膀胱上皮细胞中特异性表达．
（5）如果将药物蛋白基因转入动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中，从转基因牛、羊尿液中提取药物比从乳汁中提取药物的更大优越性在于不受时间和性别的限制．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，所用的仪器为显微操作仪．
（2）在基因工程中，构建基因表达载体时，需先用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体结合形成重组DNA．常用的运载体有质粒、动植物病毒、噬菌体的衍生物等，而作为运载体必须具备相应的条件，例如应具有标记基因以便进行筛选．由于受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞表达，因此进行基因转移时，通常要将外源基因转入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）检测目的基因是否插入了小鼠的基因组通常采用DNA分子杂交技术．
（4）在研制膀胱生物反应器时，应在目的基因前加膀胱组织特异性表达的启动子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮细胞中特异表达．
（5）从转基因牛羊尿液中提取药物不受时间和性别的限制，而从动物乳汁中提取药物则受到限制．
故答案为：
（1）显微注射法     显微操作仪
（2）同种限制    DNA连接      质粒     动植物病毒     噬菌体的衍生物     标记基因      受精卵（或早期胚胎）      受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞表达．
（3）DNA分子杂交（核酸探针）
（4）膀胱上皮
（5）不受时间和性别的限制

点评 本题综合考查基因工程技术方面的知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤及应用；识记目的基因检测与鉴定的方法；明确动物受体细胞运用显微注射法，并能结合所学的知识准确答题．