Question

回答有关微生物的问题．
已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A．现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如图．

（1）步骤一使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，其中含有细菌生长所需的水、

 

等营养物质（至少写出3种）；该培养基是

 

（多选）．
A．固体培养基    B．液体培养基    C．通用培养基    D．选择培养基
（2）步骤一采用

 

接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的，最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是

 

．
（3）无论是培养基（液），接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是

 

．
（4）步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，预测可能的结果并推测结论：
①A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，两者未分离．
②

 

．
③

 

．
（4）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量测定结果都如39题中①的情况，则应

 

，再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养

专题：

分析：解答本题需掌握：1．培养基的概念、种类及营养构成
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质．

（3）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2．无菌技术
（1）关键：防止外来杂菌的入侵．
（2）具体操作
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒．
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌．
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行．
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触．
3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
4、接种方法：平板划线法和稀释涂布法．
（1）平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种．
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁），右手拿接种环先在A区划3-4条连续的平行线（线条多少应依挑菌量的多少面定）．划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果．在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方（不要放入皿盖内），以防止杂菌的污染．
③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线．再从B区作C区的划线．最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成．随即将皿底放入皿盖中．烧去接种环上的残菌．
④等平板凝固后，将平板倒置．
（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养．在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落．能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法．

解答： 解：（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，该培养基是通用培养基或液体培养基或选择培养基．
（2）由图可知，步骤一采用平板划线法接种，步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是筛选、分离两种类型的细菌．
（3）接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是防止杂菌污染．
（4）若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，若A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，说明两者未分离；若A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ；若B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ．
（5）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量都下降，说明两种细菌还未分开，则需要重复步骤1和步骤2再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．
故答案为：
（1）无机盐、碳源、氮源   B、C、D
（2）划线法  筛选、分离两种类型的细菌
（3）防止杂菌污染
（4）②A含量明显下降，而B含量几乎未变，则得到细菌Ⅰ③B含量明显下降，而A含量几乎未变，则得到细菌Ⅱ
（5）重复步骤1和步骤2

点评：本题主要考查微生物的实验室培养的相关知识，意在考查考生对相关知识的理解，把握知识间内在联系的能力．