Question

19．尿素是一种高浓度氮肥用长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用．分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解．某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：
尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用．分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解．
某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4•7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
14g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌不能（能/不能），原因是培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为唯一氮源的微生物．
（2）接种前要对培养基进行灭菌．在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
（3）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高，应当怎样操作才可避免此种现象？对菌液进行梯度稀释．
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将其接种在斜面固体培养基上，等长成菌落后放在4⁰C的冰箱中保存．若要长期保存，可以采用甘油管藏法的方法．

Answer 1

分析 1、选择培养基：在微生物学中，将允许特定微生物种类生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基．由于分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素为唯一氮源的培养基上，分解尿素的菌能以尿素为氮源生长，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而无法生长．
2、常用的接种微生物的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液涂布到固体琼脂培养基上，进行培养，在稀释度足够高的菌液里，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，获得由单个细胞繁殖而来的菌落．
3、菌种保存

	临时保存法	甘油管藏法
适用对象	频繁使用的菌种	长期保存的菌种
培养及类型	固体斜面培养基	液体培养基
温度	4℃	-20℃

解答 解：（1）由图中培养基的配方可知，该培养基中能提供氮源的是蛋白胨和尿素，不能利用尿素的菌可以以蛋白胨为氮源生长，所以不能分离出分解尿素的菌．
（2）微生物筛选与分离成功的关键是无菌操作．因此，接种前要对培养基进行灭菌（高压蒸汽灭菌法）．在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
（3）培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液没有梯度稀释，浓度过高．要避免此种现象需要对菌液进行梯度稀释．
（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将其接种在斜面固体培养基上，等长成菌落后放在4⁰C的冰箱中保存．若要长期保存，可以采用甘油管藏的方法．
故答案为：
（1）不能       培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为唯一氮源的微生物
（2）灭菌    无菌
（3）菌液浓度过高     对菌液进行梯度稀释
（4）斜面固体      甘油管藏法

点评 本题旨在考查学生对选择培养基的选择作用、稀释涂布平板法和平板划线法接种微生物、微生物培养的无菌操作等技术的熟练掌握和应用．