Question

2．某种工业生产中会产生一些含碳有机废水（含氮量极少），某细菌X在该种生物处理废水中能发挥很大作用，现要对其进行筛选．

培养液	NaNO3	牛肉膏	K2HPO4	MgSO4•7H2O	KCl	NiSO4
A	-	-	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L
B	3g/L	3g/L	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L
C	3g/L	-	1g/L	1g/L	0.5g/L	0.01g/L

（1）应选用上表中的C（填图中字母）培养液，解释不选用其他培养液的原因：①A培养基中缺乏氮源，②B培养基中含有机废水以外的碳源．
（2）接种前培养基必须进行高压蒸汽灭菌，为确定培养基灭菌是否彻底，可设置不加入废水（或未接种或加入等量无菌水）的培养基为对照组；若要制作平板，常在培养液中加入琼脂作为凝固剂．对获得的目的菌种，可采用甘油管藏法，长期保存．
（3）为获得单个菌落，某同学将细菌X接种到正确的培养基中，经培养后，其中一个平板的菌落分布如图所示，该同学的接种方法是稀释涂布平板法，所用的主要接种工具是涂布器，该同学可能的操作失误是涂布不均匀．
（4）对细菌X计数时，可吸取菌液1mL稀释1000倍，然后吸取稀释后的菌液0.2mL，接种于平板上培养，一段时间后观察到三个平板上的菌落数为61、62、63，则该菌液中的细菌X数量约为3.1×10⁵个/mL．

Answer 1

分析 筛选和分离微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．在此过程中通常需要使用选择培养基．筛选和分离污水中的细菌X需要使用以污水为唯一碳源的选择培养基

解答 解：（1）据表分析，A培养基中缺乏氮源，B培养基中含有机废水以外的碳源，所以不能筛选细菌X，而培养基C是以污水为唯一碳源的选择培养基，所以可以使用C培养基筛选X细菌．
（2）培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌；为确定培养基灭菌是否彻底，可设置不加入废水（或加入等量蒸馏水）空白培养基为对照组；固体培养基制作时需要在培养基中加入琼脂作为凝固剂．菌种的长期保存需要使用甘油管藏法．
（3）据图分析，图中的单菌落的获得的接种方法是进行稀释涂布平板法．所用的接种工具是涂布器，该同学可能的操作失误是涂布不均匀倒置菌落分布不均匀．
（4）根据题意可知，该菌液中的细菌X数量约为（61+62+63）÷3÷0.2×1000=3.1×10⁵个/ml．
故答案为：
（1）C  A培养基中缺乏氮源  B培养基中含有机废水以外的碳源（后两空可交换顺序）
（2）高压蒸汽  不加入废水（或未接种或加入等量无菌水）  琼脂  甘油管藏
（3）稀释涂布平板法  涂布器  涂布不均匀
（4）3.1×10⁵

点评 本题主要考查微生物的筛选与分离及微生物的实验室培养，意在强化学生对微生物的筛选与培养的相关知识的理解与运用．