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ch1L基因是蓝藻拟核DNA上与叶绿素合成有关的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。构建过程如下:

第①步:用PCR技术从蓝藻环状DNA中扩增出ch1L基因片段。

第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。

第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。

第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。请根据上述资料,回答下列问题:

(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶?        

PCR扩增DNA时必须加入引物,引物的实质是          ,其作用是                               

(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是                   。为消除PCR扩增过程当中外源DNA污染造成的影响,应如何设置对照?                      

(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用                       

对基因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的              键打开。

(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是         ,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。

(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用            制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入              可将变异株细胞筛选出来。

(1)TaqDNA聚合酶    一小段DNA或RNA   与模板结合,使DNA聚合酶从引物3’端延伸DNA链

(2)引物通过碱基互补与DNA模板链结合    对照组不加DNA模板,其它条件相同

(3)同一种DNA限制性内切酶   磷酸二酯键

(4)小型环状DNA

(5)红霉素抗性基因     红霉素


解析:

(1)DNA聚合酶催化DNA复制过程;引物一般为一小段单链DNA,新的DNA单链将接在引物后延伸。

(2)PCR分三步:第一是变性,主要是DNA双链解开,第二是退火,也称复性,主要是引物与DNA单链结合,第三是延伸,主要是新的DNA单链延伸。通过对照,说明问题,如果不加DNA模板仍有新DNA产生,说明有外源DNA污染。

(3)注意用同一种限制性内切酶,才能切出相同的黏性末端,从而才能相连;注意限制性内切酶破坏的是磷酸二酯键,不是氢键。

(4)了解质粒本质。

(5)因为重组质粒中含有红霉素抗性基因,所以可用红霉素抗性基因制成探针,让探针与重组质粒中含有红霉素抗性基因发生杂交。在含有红霉素的培养基中,如果细菌仍能生存,说明导入了重组基因。

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科目:高中生物 来源:湖南省雅礼中学2010届高三第三次月考生物试卷 题型:综合题

(10分)ch1L基因是蓝藻拟核DNA上与叶绿素合成有关的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。构建过程如下:

第①步:用PCR技术从蓝藻环状DNA中扩增出ch1L基因片段。
第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。
第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。
第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。请根据上述资料,回答下列问题:
(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶?        
PCR扩增DNA时必须加入引物,引物的实质是         ,其作用是                               
(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是                  。为消除PCR扩增过程当中外源DNA污染造成的影响,应如何设置对照?                      
(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用                       
对基因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的             键打开。
(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是        ,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。
(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用           制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入             可将变异株细胞筛选出来。

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科目:高中生物 来源:2012-2013学年江苏省高三高考最后一卷生物试卷 题型:综合题

ch1L基因是蓝藻拟核DNA上与叶绿素合成有关的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建该种生物缺失ch1L基因的变异株细胞。构建过程如下:

第①步:用PCR技术从蓝藻环状DNA中扩增出ch1L基因片段。

第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。

第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。

第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。请根据上述资料,回答下列问题:

(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶?          

PCR扩增DNA时必须加入引物,其作用是                                        

(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是                                         

(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用                                  酶对基 因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的               键打开。

(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是                      ,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。

(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用                   制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入              可将变异株细胞筛选出来。

 

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第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。

第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。

第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。请根据上述资料,回答下列问题:

(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶?        

PCR扩增DNA时必须加入引物,引物的实质是          ,其作用是                               

(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是                   。为消除PCR扩增过程当中外源DNA污染造成的影响,应如何设置对照?                      

(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用                       

对基因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的              键打开。

(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是         ,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。

(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用            制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入              可将变异株细胞筛选出来。

 

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科目:高中生物 来源:0110 模拟题 题型:读图填空题

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第①步:用PCR技术从蓝藻环状DNA中扩增出ch1L基因片段。
第②步:将ch1L基因与质粒构建形成重组质粒1。
第③步:将重组质粒1中ch1L基因中部0.8kb片段删除,用一段红霉素抗性基因取代之,得到重组质粒2。
第④步:将重组质粒2导入蓝藻细胞,由于改造后的基因与ch1L基因仍有很长的序列相同,所以能准确地与其发生同源重组,产生出缺失ch1L基因的突变株。
请根据上述资料,回答下列问题:
(1)第①步用PCR技术扩增DNA片段时用到的耐高温的酶通常是指什么酶?________。PCR扩增DNA时必须加入引物,其作用是_____________。
(2)利用PCR技术扩增DNA一般要经过三十多次循环,每次循环都要经过三个步骤,其中“复性”这一步骤发生的变化是________________。
(3)构建重组质粒1、2时,为保证成功率,往往使用_________酶对基因和质粒进行切割,以切出相同的黏性末端,便于连接。此酶的作用是将DNA分子的___________键打开。
(4)质粒是基因工程中最常用的运载体,其化学本质是________,此外还可用噬菌体、动植物病毒作用为运载体。
(5)导入重组质粒2以后,往往还需要进行检测和筛选,可用________制成探针,检测是否导入了重组基因,在培养基中加入_______________可将变异株细胞筛选出来。

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