Question

【题目】用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示。回答下列问题:

(1)①过程所需的酶是_____。从cDNA文库中获取的目的基因______(填“有”或“无”)启动子。实现②过程常用_____技术,该技术的前提是要有_______,以便合成引物。

(2)过程⑧将重组表达载体导入大肠杆菌时,首先用Ca2+处理大肠杆菌,目的是_____。然后将______溶于缓冲液中与该大肠杆菌混合,在一定温度下完成转化。

(3)过程④可利用________技术鉴定CarE基因是否已导入大肠杆菌。

Answer 1

【答案】逆转录酶 无 PCR 一段已知目的基因的核苷酸序列 使大肠杆菌处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 重组表达质粒 DNA分子杂交

【解析】

1、将某种生物体内的DNA全部提取出来，用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后，将这些DNA片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，这个受体菌群体就叫做这种生物的基因组文库。

2、如果用某种生物发育的某时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA（也叫cDNA)片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的cDNA文库。

3、目的基因检测与鉴定

（1）检测目的基因是否已导入受体细胞。常采用DNA分子杂交技术，即将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，如果显示出杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA中。

（2）检测目的基因是否转录出了mRNA。采用分子杂交技术，从转基因生物中提取mRNA，用标记的目的基因作探针，与mRNA杂交，如果显示出杂交带，则表明目的基因转录出了mRNA。

（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质。采用抗原—抗体杂交，即从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原一抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质。

(1)①过程以某种生物发育的某个时期的mRNA为模板反转录产生的多种互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做这种生物的cDNA文库。由于启动子和终止子不能转录，故cDNA文库中获取的目的基因无启动子。PCR技术（过程②）可在体外大量扩增目的基因，但前提是要一段有已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。

(2)过程③将重组表达载体导入大肠杆菌时，首先用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。然后将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。

(3)鉴定CarE基因是否已导入大肠杆菌，常采用DNA分子杂交技术。