Question

【题目】正常人体细胞中含有抑癌的P53基因，若细胞中P53基因失活而不能表达，易形成肿瘤。有科学家希望利用腺病毒将P53基因导入肿瘤细胞来治疗癌症。腺病毒是一种双链 DNA 病毒，具有抑制P53基因活性的55Kda基因以及病毒复制基因E1，能在P53 异常的肿瘤细胞中增殖，也会侵染正常的T细胞。请回答：

(1)P53基因是__________(填“目的”或“标记”)基因。为构建有疗效的、安全的重组腺病毒，要破坏____________基因，因此限制酶最好选择__________________。

(2)将P53基因与腺病毒重组，还需要_________________________酶。重组的成功率不高，反应体系中还有大量非重组的野生型病毒的DNA存在，这是因为_____________________。

(3)要获得更多重组病毒，可采用的方法是将E1基因导入肿瘤细胞的基因组中，再用重组病毒侵染含该种肿瘤细胞并在体外培养。将E1基因导入肿瘤细胞后，再进行病毒侵染的理由是_____________。

(4)因为重组病毒与非重组病毒的_____________________不同，其质量(密度)也不同，故可采用离心分层纯化法筛选重组病毒。

(5)腺病毒载体只能直接注射到肿瘤部位，若静脉注射，到达肿瘤组织的病毒载体非常少，难以达到治疗效果，可能的原因是__________________________________。

Answer 1

【答案】目的 55Kda基因和E1 EcoRI和BamHII DNA连接 切下片段有可能与原基因重新结合 让病毒仅在含E1基因的肿瘤细胞中复制，而在不含E1基因的人体正常细胞中不能复制，提高安全性 DNA分子长度 免疫系统将病毒消灭

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

(1)据题意可知P53基因是目的基因。为构建有疗效的、安全的重组腺病毒，要破坏55Kda基因和E1基因，因此限制酶最好选择EcoRI和BamHI。
（2）将P53基因与腺病毒重组，还需要DNA连接酶。重组的成功率不高，反应体系中还有大量非重组的野生型病毒的DNA存在，这是因为切下片段有可能与原基因重新结合。
（3）要获得更多重组病毒，可采用的方法是将E1基因导入肿瘤细胞的基因组中，再用重组病毒侵染含该种肿瘤细胞并在体外培养。将E1基因导入肿瘤细胞后，再进行病毒侵染的理由是让病毒仅在含E1基因的肿瘤细胞中复制，而在不含E1基因的人体正常细胞中不能复制，提高安全性。
（4）因为重组病毒与非重组病毒的DNA分子长度不同，其质量(密度)也不同，故可采用离心分层纯化法筛选重组病毒。
（5）腺病毒载体只能直接注射到肿瘤部位，若静脉注射，到达肿瘤组织的病毒载体非常少，难以达到治疗效果，可能的原因是免疫系统将病毒消灭（其他合理答案也可给分）。