Question

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

1.用图1中的外源DNA（含有目的基因D）和图2中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和            。前者（酶）的专一性很强，其作用特点是                         。
2.应该使用限制酶BamHⅠ同时处理质粒、外源DNA，而不选择其他3种，原因在于（  ）。（多选）
A.若使用SmaⅠ或者MspⅠ会破坏目的基因
B.若使用SmaⅠ切割质粒，能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低
C.若使用MboⅠ切割质粒，质粒上会有2处被切开，会将质粒切成两段不利于筛选
D.使用限制酶BamHⅠ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端，以便目的基因和运载体定向连接，不至于反向连接
E．使用BamHⅠ切割质粒，质粒上会有1处被切开，破坏抗生素A抗性基因，保留抗生素B抗性基因，以便于将来筛选含目的基因的受体细胞
F．只有使用BamHⅠ切割，才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端。
3.若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有    种不同DNA片段。若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒，则可得到      个DNA片段。

Answer 1

1.DNA连接酶  能够识别特定的碱基序列并加以切割
2.ACE
3.4  3

解析试题分析：1.基因工程中构建重组质粒需要使用限制酶和DNA连接酶，限制酶的作用特点是能够识别特定的碱基序列并加以切割。
考点：本题考查基因工程中构建重组质粒时的工具酶及其特点等相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点。
2.基因工程中使用限制酶处理质粒、外源DNA是时要保证一不能破坏目的基因，二要是不出现质粒自身相连接或目的基因自身相连接，三是要保证重组质粒中至少要保留1个标记基因以便于筛选，四是要保证质粒和目的基因具有相同的末端以便于质粒和目的基因相连接。所以应选ACE。
考点：本题考查基因工程中限制酶的特点及其使用时应遵循的原则等相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。
3.从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，即包含基因D 片段也包含基因d片段。用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有4种不同DNA片段。若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒，则可得到      3个DNA片段。
考点：本题考查不同限制酶的作用特点，意在考查考生能理解所学知识的要点。