Question

【题目】美国科学工作者Mirkov发现菠菜细胞中有一种毒蛋白能攻击很多细菌和真菌，欲培育产生毒蛋白抵抗柑橘青果病的柑橘新品种，其具体步骤如图所示：

（1）柑橘茎段芽的芽尖细胞通过MS培养基培养出愈伤组织的过程叫做_____．

（2）利用某一时期菠菜体细胞内形成的mRNA通过逆转录过程形成互补DNA片段，与载体连接后储存在受体菌群中，这些受体菌群被称为菠菜的_____；要在短时间内大量扩增菠菜的毒蛋白基因可利用PCR技术，该技术一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为_____三步．如果开始的毒蛋白基因只有一个，第n次循环需要引物_____对．

（3）重组的Ti质粒上除了菠菜的毒蛋白基因、标记基因外，还必需要有_____等．将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用_____处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入．将含有重组Ti质粒的农杆菌与柑橘愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得导入成功的受体细胞，该筛选过程是通过在培养基2中加入_____实现的．

Answer 1

【答案】 脱分化 cDNA文库 变性、复性和延伸 2n﹣1 启动子和终止子 Ca2+ 潮霉素

【解析】试题分析：本题考查基因工程中培育转基因生物的相关知识，分析基因工程的原理、PCR技术过程和植物组织培养的知识要点，再结合题意作答。

（1）柑橘的外植体通过MS培养基培养出愈伤组织的过程叫做脱分化。
（2）利用某一时期菠菜体细胞内形成的mRNA通过逆转录过程形成互补DNA片段，与载体连接后储存在受体菌群中，这些受体菌群被称为菠菜的cDNA文库；在最开始的变性之前常要进行一次预变性。PCR的一个循环要经历变性、复性和延伸三个步骤；第n次复制是从n-1次结束开始的，第n-1次结束后的基因有2n-1个，每个基因复制1次需要1对引物，第n次复制需要2n-1对引物。
（3）重组表达载体通常包括目的基因、标记基因、启动子和终止子等；将目的基因导入微生物细胞最常用的转化方法是用Ca2+处理细胞，使细胞处于感受态；在培养基中加有潮霉素，可以筛选出具有潮霉素抗性的细胞，用以获得导入成功的受体细胞。