Question

13．研究人员在培育转bt基因抗虫番茄过程中，选用hpt（抗潮霉素基因）为标记基因．为了提高转基因番茄的安全性，在筛选成功后，用Cre酶（能特异识别loxp位点，切除loxp位点间的基因序列）切除hpt．相关技术流程如图．

（1）步骤①中，为防止原番茄植株带有病毒，应选用分生组织（或茎尖或根尖或芽尖）作为外植体；培养时，常在培养基中加入2，4-D，其作用是诱导形成愈伤组织（或诱导脱分化）．
（2）步骤②将bt基因导入愈伤组织的最常用方法是农杆菌转化法．
（3）步骤③需在培养基中加入潮霉素以初步筛选出转入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因组DNA，用hpt特异性引物进行PCR．其中，植株1和2的PCR产物电泳结果如上图，据此判断，植株2为不具有hpt的抗虫番茄．

Answer 1

分析 分析题图：图示表示转bt基因抗虫番茄的培育过程，其中①表示脱分化过程，②表示将目的基因导入受体细胞，③表示再分化和筛选过程，最后还要用Cre酶（能特异识别loxp位点，切除loxp位点间的基因序列）切除hpt．据此答题．

解答 解：（1）由于植物分生区附近的病毒极少，甚至无病毒，因此步骤①中，为防止原番茄植株带有病毒，应选用分生组织（或茎尖或根尖或芽尖）作为外植体；该步骤所用的培养基中要加入2，4-D，其作用是诱导形成愈伤组织（或诱导脱分化）．
（2）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，因此步骤②将bt基因导入愈伤组织的最常用方法是农杆菌转化法．
（3）由图可知，抗性基因是潮霉素抗性基因，因此步骤③需在培养基中加入潮霉素以初步筛选出转入bt基因的植株．
（4）提取F1植株的基因组DNA，用hpt特异性引物进行PCR．其中，植株1出现PCR产物，说明其具有hpt，而植株2没有出现PCR产物，说明其不具有hpt．因此，植株2为不具有hpt的抗虫番茄．
故答案为：
（1）分生组织（或茎尖或根尖或芽尖）诱导形成愈伤组织（或诱导脱分化）
（2）农杆菌转化法
（3）潮霉素
（4）2

点评 本题结合转bt基因抗虫番茄的培育过程图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中的相关细节，能结合题中和图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．