Question

【题目】烟草叶片感染烟草花叶病毒（TMV）后既影响产量也影响品质，沙棘果中含有的苦木素对TMV病毒具有抑制作用，现将沙棘中与苦木素合成有关的基因导入烟草，获得抗TMV的烟草，培育过程如下图。请回答有关问题：

（1）若①过程是由mRNA通过逆转录得到的目的基因，则目的基因中不含有_________________（答两项），②过程构建的Ti质粒除了含有目的基因，还必须有标记基因、_________。标记基因是__________，其功能是___________________。

（2）③过程将重组Ti质粒导入烟草体细胞的常用方法是____________。Ti质粒上的T-DNA可使目的基因进入受体细胞，并将其_____________。

（3）过程⑤可采取_____________的方法，检测植株是否合成与苦木素合成相关的蛋白质；在个体水平的鉴定过程中，可通过______________的方法来确定植株是否具有抗性。

Answer 1

【答案】启动子、内含子 启动子、终止子 卡那霉素基因 鉴定和筛选导入目的基因成功的受体细胞 农杆菌转化法 插入植物的染色体上 抗原——抗体杂交 接种TMV病毒

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）利用逆转录法得到的目的基因不含有启动子和内含子，构建重组Ti质粒，除了含有目的基因外，还必须含有启动子、终止子和标记基因，该培育过程中的标记基因为卡那霉素基因，用于鉴定和筛选导入目的基因成功的受体细胞。

（2）通常采用农杆菌转化法将重组质粒导入受体细胞，Ti质粒上的T-DNA可使目的基因进入受体细胞，并将其插入植物的染色体上。

（3）可采用抗原抗体杂交法检测与苦木素合成相关的基因是否表达，通过接种TMV病毒进行个体水平上的检测，检测烟草有无对TMV的抗性。