Question

科研人员以金定鸭、长乐灰鹅和象洞鸡的全血为实验材料，比较苯酚一氯仿抽提法（方法A）和盐析法（方法B）提取血液中DNA的效率．图中EDTA具有破坏细胞膜、抑制DNA酶活性的作用，SDS具有破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性和抑制DNA酶活性的作用．提取过程和结果如下：

实验结果：

测定项目	金定鸭		长乐灰鸭		象洞鸡
	方法A	方法B	方法A	方法B	方法A	方法B
纯度/OD值	1.95	1.96	1.85	2.36	1.96	1.90
浓度/μg?mL-1	534.29	240.00	899.17	583.33	385.35	914.17

请回答：
（1）本实验不选择哺乳动物血液为实验材料的原因是

 

．
（2）步骤①中，若只用蛋白酶K消化处理．对实验结果的影响是

 

．
（3）步骤③中．破碎细胞常用的方法是

 

．步骤⑤加人蒸馏水的目的是

 

．
（4）苯酚和氯仿-异戊醇不溶或微溶于水，密度均大于水，步骤②⑦所依据的原理是

 

．
（5）对于长乐灰鵝、象洞鸡来说，较适宜的DNA提取方法分别是

 

、

 

．
（6）实验结果表明，不同方法提取的DNA中，影响DNA纯度的主要物质是

 

．相同体积的不同鸟类的血液DNA提取量有明显差异，其原因可能是

 

．

Answer 1

考点：DNA的粗提取和鉴定

专题：

分析：根据流程图分析，苯酚一氯仿抽提法（A法），①步骤中加入EDTA破坏细胞膜、抑制DNA酶活性的作用；SDS破坏细胞膜和核膜、使蛋白质变性和抑制DNA酶活性的作用；蛋白酶K分解蛋白质；②步骤中加入苯酚提取DNA．
盐析法（方法B），③步骤中加入蒸馏水，使得血细胞吸水胀破；④步骤中加入氯化钠溶液溶解DNA；⑤步骤加入蒸馏水，降低氯化钠溶液浓度，使得DNA析出；⑥步骤加氯化钠溶液再溶解DNA；⑧⑨加入乙醇，提取杂质较少的DNA．
根据表格中浓度和纯度分析，金定鸭和长乐灰鸭适宜采用苯酚一氯仿抽提法（A法）；象洞鸡适宜采用盐析法（方法B）．

解答： 解：（1）哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和线粒体，DNA含量较少，不适宜作为提取DNA的实验材料．
（2）步骤①中，若只用蛋白酶消化处理，没有加入EDTA和SDS抑制DNA酶活性，则DNA的提取量减少，纯度降低．
（3）步骤③中．血细胞液中加入一定量的蒸馏水，并用玻璃棒搅拌，使得血细胞吸水胀破；步骤⑤加入蒸馏水的目的是降低NaCl溶液的浓度（2mol/L→0.14mol/L），析出DNA．
（4）步骤②⑦所依据的原理是DNA不溶于苯酚、氯仿-异戊醇，蛋白质等杂质溶于苯酚、氯仿-异戊醇，提取杂质较少的DNA．
（5）根据表格中纯度和浓度比较，长乐灰鵝DNA提取方法是苯酚一氯仿抽提法（方法A）较适宜；象洞鸡是盐析法（方法B）．
（6）实验结果表明，不同方法提取的DNA中，影响DNA纯度的主要物质是RNA；不同鸟类血液中血细胞的密度不同，则相同体积的不同鸟类的血液DNA提取量有明显差异．
故答案为：
（1）哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和线粒体
（2）DNA的提取量减少，纯度降低
（3）血细胞液中加入一定量的蒸馏水，并用玻璃棒搅拌    降低NaCl溶液的浓度，析出DNA
（4）DNA不溶于苯酚、氯仿-异戊醇，蛋白质等杂质溶于苯酚、氯仿-异戊醇
（5）苯酚一氯仿抽提法（方法A）       盐析法（方法B）
（6）RNA      不同鸟类血液中血细胞的密度不同（或不同鸟类血细胞中DNA含量不同）

点评：本题考查DNA的粗提取实验，意在考查学生识记基础知识和解决问题的能力，属于中档题．