下图表示利用基 因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：
（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别下列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶Ⅱ切割质粒，用限制酶Ⅰ切割抗虫基因，这样处理的原因是 。 ①过程在 （体内/体外）进行。
（2）将通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有 的培养基上，能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。
（3）在基因操作中，将重组质粒导入大肠杆菌的目的是 。
（4）经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，并表现出抗虫性状，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的 。（5）⑤过程所用技术称为 ，从遗传 学角度来看，根本原因是根细胞具有 。
（1）获得目的基因，并能和 质粒连接，同时能使质粒含有一个完整的标记基因 体外 （2）四环素
（3）大量复制目的基因 （抗虫基因）
（4）3/4
（5）植物组织培养 发育成完整个体的全部遗传物质
【解析】
试题分析：（1）质粒中两个标记基因中均有限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，若用该酶切，抗性基因破坏，所以要用限制酶Ⅰ切割抗虫基因，获取目的基因，应用限制酶Ⅱ切割质粒，能和目的基因连接；目的基因与运载体结合在体外进行；（2）标记基因是抗四环素基因，所以应有含四环素的选择培养基上；（3）将重组质粒导入大肠杆菌的目的是，由于大肠杆菌的繁殖快，周期短，可以扩增目的基因；（4）AaXAa后代中3/4有抗性；（5）根据细胞的全能型（含有发育成完整个体的全部遗传物质），将以分化的根细胞培养成一棵植株，运用了植物组织培养技术。
考点：本题考查生基因工程的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的能力。
科目：高中生物 来源：2013-2014学年浙江五校高三第一次联考生物卷（解析版） 题型：选择题
下图表示利用植物细胞工程对棉花进行改良的过程，①②③④表示实验过程，请据图回答，下列说法正确的是
A．外源基因能够导入并大量复制的物质基础是自然界共用一套密码子
B．②过程能定向改变原生质体的遗传特性
C．③过程只能通过液体悬浮培养技术才能实现
D．基因工程技术与花药离体培养技术相结合可快速获得纯合棉花植株
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科目：高中生物 来源：2012-2013学年安徽省合肥市高三第三次教学质量检测理科综合生物试卷 题型：综合题
利用玉米秸秆生产乙醇,其技术流程为：
(1) 玉米秸杆经预处理后，应该选用纤维素酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。 纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中 纤维素分解菌的实验流程:土壤取样→选择培养—梯度稀释→鉴别培养。
①从土壤中分离出分解纤维素细菌的培养基配方如下：纤维素粉5g, NaNO3 1g、 Na2HPO4 • 7HZ0 1.2g、KH2PO4 0.9 g,MgS04·7H20 0.5g、K Cl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g(蒸馏水定容到IOOOmU9该培养基能初步选择出分解纤维素细菌的原因是______________
②为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入_______染液，将筛选获得的菌液稀释后用涂布平板法方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生_______的菌落作为菌种进行扩大培养。
③从分解纤维素细菌中提取出的纤维素酶首先要检测____________________________，以便更好地将酶用于生产实践。为了使分离出的纤维素酶能够反复使用，最好采用_____________________或_____________________方法将酶固定化。
(2) 发酵阶段需要的菌种是酵母菌，在产生酒精时要控制的必要条件是______________。
(3) 发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性,从而影响进一步的发酵。科学家利用基 因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR 技术扩增目的基因。在PCR反应体系中，除了要加入模板、原料外，还需要加入_______和_______等
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科目：高中生物 来源：2011-2012学年江苏省高三百校大联考一模生物试卷 题型：综合题
下图表示科学家通过基因工程培育抗早棉时，从苏云金芽孢杆菌中提取抗早基因，将其“放入”棉花细胞中与棉花的DNA分子结合起来而发挥作用的过程示意图。请据图回答下列有关问题：
（1）右图1表示在上图过程①中同时利用EcorI、EcoR52切割目的基因和运载体，以形成两种不同的黏性末端，这种双酶切的优点是 。
（2）图中过程③涉及的生物技术是 ；在含四环素的培养基中培养植物细胞，导入重组质粒的细胞能否增殖 ，依据是 。
（3）判断基因转化是否成功，应对转基因植物进行鉴定，如果培育成功的植株能抗虫，还应进行 水平鉴定，以确定该变异能否遗传给后代。将上述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，往往有很多植株不再具有抗虫性，原因是 ，为获得稳定遗传的转基因植株，还需要对转基因植株进行严格的 。
（4）图2表示苏云金芽孢杆菌细胞中的某些生命活动过程，则①处于需要有 酶的催化，①②两处共有的一种碱基配对方式是 。
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科目：高中生物 来源： 题型：阅读理解
请分析回答下列有关基因工程问题：
Ι 基因工程是按人们预先设计的蓝图，将目的基因通过一定方法导入到另一种生物的细胞中，使之产生符合人类需要的新的遗传性状或创造出新的生物类型的现代技术。
57.基因工程常用的三种工具为限制性内切酶、 、质粒，通常选择质粒作为“目的基因的运输载体”是由于 。
58.基因工程一般包括四步：获取目的基因；目的基因与运载体重组； ；
。
Ⅱ 在基因工程中通常需要利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR如右图示，包括三个基本反应步骤：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后双链解离；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，合成一条新的与模板DNA 链互补的脱氧核苷酸链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得较多的目的基因。
59.温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链结合形成DNA模板--引物结合物时所遵循的原则是 。
60.在PCR技术中，引物的作用是 。
61.从理论上推测，第三轮循环产物中含有引物B的DNA片段所占比例为 。
62.下图表示利用PCR技术获取目的基因X的第一次循环产物。则至少需要在 轮循环产物中才能开始出现独立且完整的的X基因。如果经过n次循环，则产物中①所示DNA分子数为 。
63.用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点。
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