Question

【题目】针对肿瘤细胞相关的异常分子和基因，可设计和研制特异性的靶点药物，靶向杀伤肿瘤细胞。

（1）下图所示转铁蛋白受体（TfR）与转铁蛋白（Tf）结合，通过胞吞方式，将铁元素运输至胞内。肿瘤细胞由于增长快速，需要更多的铁元素，因此肿瘤细胞表面TfR表达量________（上升或下降）。利用单克隆抗体技术，可研制相应的抗TfR抗体，它们与TfR特异性结合，______________进而影响肿瘤细胞增长。

（2）若想获得单克隆抗体，可将________的小鼠的B细胞与________融合，继而筛选出________的杂交瘤细胞，大量培养获得相应抗体，由于该抗体来源于小鼠，称为鼠源单克隆抗体。

（3）将该鼠源单克隆抗体与人癌细胞混合后培养，发现单独使用抗体对人癌细胞的增殖无显著影响，可能的原因是抗体与细胞表面TfR结合后________________________，为探究该假说成立与否，采用荧光标记抗体定位，结果发现抗体出现在细胞膜上和细胞内，则此实验结果支持该假说。

（4）由于在本实验中单独使用抗体效果不佳，考虑利用抗体介导杀伤细胞对靶细胞的裂解作用来抑制癌细胞，该过程如下图所示。若无论何种抗体，杀伤细胞都可与之结合，最终使靶细胞裂解死亡，则说明抗体Fc段在不同种类的抗体中________（相同或不同）。

（5）人的杀伤细胞无法识别鼠源单克隆抗体的Fc段，科学家为此构建了人-鼠嵌合抗体。该过程基本流程设计为：________________________________（用以下字母排序）。

A．逆转录获得Fab基因编码区

B．从分泌鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA

C．导入细胞中进行表达

D．对基因的表达产物进行鉴定

E．将Fab段的基因编码区与人的Fc段基因进行拼接，构建含人-鼠嵌合抗体基因的质粒

F．与人癌细胞混合培养检测抗体对癌细胞作用效果

Answer 1

【答案】上升 阻止了Tf与TfR结合，抑制铁元素的摄取 免疫接种过TfR 骨髓瘤细胞 既能无限增殖又能分泌抗体 同样会被内吞进细胞 相同 BAECDF

【解析】

1、单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。

2、基因工程的基本步骤：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定。

3、人工合成基因的方法主要有两条途径，一条途径是以目的基因转录成的mRNA为模版，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对的原则，推测出它的基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以脱氧核苷酸为原料合成目的基因。

（1）肿瘤细胞表面TfR表达量增多，能够与Tf结合，运输更多的铁元素，适应肿瘤细胞的快速增长。抗TfR抗体与TfR特异性结合，阻断了与Tf的结合途径，铁元素运输受阻，肿瘤的生长受到抑制。

（2）若要获得抗TfR的单克隆抗体，可将接种过TfR的免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗TfR抗体的杂交瘤细胞，大量培养获得该抗体。

（3）由“结果发现抗体出现在细胞膜上和细胞内，则此实验结果支持该假说”可推断，抗体与细胞表面TfR结合后，同样会被内吞进细胞。

（4）由图可知，杀伤细胞与抗体的Fc段结合，若无论何种抗体，杀伤细胞都可与之结合，说明抗体Fc段在不同种类的抗体中相同。

（5）由分析中基因工程的基本操作流程可知，构建了人-鼠嵌合抗体过程基本流程排序为BAECDF。