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    9．编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示．

    回答下列问题：
    （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT…CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动．
    （2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为模板DNA，加入了4种脱氧核苷酸作为合成DNA的原料．
    （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2．
    ①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是细胞培养（传代培养）．细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是维持培养液中的PH．
    ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少C（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．

    分析 1、PCR技术扩增目的基因（适用于目的基因的核苷酸序列已知的情况）．PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，其原理是DNA复制，需要模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），以指数的方式扩增，即约2n．引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点．
    2、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
    （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
    （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．
    （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因．
    3、动物细胞培养条件：
    （1）无菌无毒环境：无菌--对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素．；无毒--定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对自身造成危害．
    （2）营养：
    成分：所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分．
    培养基类型：合成培养基（将细胞所需的营养物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基）
    （3）温度和pH值：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜，多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4．
    （4）气体环境：通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养．O2：是细胞代谢所必需的  CO2主要作用是维持培养液的pH．

    解答 解：（1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动编码蛋白乙的DNA序列的转录，因此所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙．
    （2）PCR技术扩增目的基因的条件需要：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．序列甲作为模板DNA，DNA的原料为4种脱氧核苷酸．
    （3）①动物细胞可以通过细胞培养（传代培养）继续增殖．细胞培养过程中，需要气体环境，其中气体CO2的作用是维持培养液中的PH．
    ②分析坐标图：对比甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况发现：最终效果相当，只是增殖时间不同，可以推断出A、E片段编码的肽段不会降低T淋巴细胞增殖效果．将丙蛋白分别与甲和乙蛋白刺激T淋巴细胞增殖情况比较发现：丙蛋白降低了T淋巴细胞增殖．丙基因与甲和乙基因相比较，缺少了一段C基因，也就是说若缺少C片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果．
    故答案为：
    （1）因为在启动子的下游接上的编码蛋白乙的DNA序列，不能启动
    （2）模板DNA   4种脱氧核苷酸
    （3）细胞培养（传代培养）   维持培养液中的PH
    （4）C

    点评 本题考查了基因工程、动物细胞工程的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系；理论联系实际，综合运用所学知识解决自然界和社会生活中的一些生物学问题的能力和从题目所给的图形中获取有效信息的能力．PCR扩增技术需要的酶是热稳定DNA聚合酶（Taq酶），不需要解旋酶．构建基因表达载体时，需要将目的基因接在启动子核终止子之间．

    练习册系列答案
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    （2）每对卷翅果蝇的杂交后代中卷翅和正常翅的比例均接近2：1，原因是A基因显性纯合致死．
    （3）统计每对卷翅果蝇杂交后代的性比，若雌雄比均为1：1，可断定控制基因位于常染色体上．若雌雄比均为1：2或2：1，可断定控制基因位于性染色体上．
    （4）假定控制基因位于常染色体上，则每对卷翅果蝇的杂交后代随机交配一代，在子二代中卷翅与正常翅之比为1：1．

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