科目：高中生物 来源：上海市十三校2012届高三第二次联考生物试题 题型：071
回答下列关于基因工程的相关问题。
质粒是基因工程中的一种常用的工具之一，经修饰改造后的质粒如下图七一1所示。PUC118上的Lacz基因编码β半乳糖苷酶的一条多肽链，其表达产物与菌落颜色有关；经“修饰”后的“多克隆位点”位于LacZ基因之中。AmpR是抗氮卞青霉素基因。
1．PUC118上的基因AmpR作用的是：________“多克隆位点”中含有多种限制酶的识别序列，如HindⅢ，其切割后产生的DNA片断中含有的部分序列是
，则限制酶HindⅢ的识别序列是________。
2．图2示意将目的基因导入大肠杆菌的操作步骤。其中，I～V表示操作过程；A－F表示使用的相关工其，其中的E1和E2表示有关的酶。试问：E2应是________（酶）；经过E2的切割，供体染色体中的DNA片段中游离的磷酸基团总数的变化是：________。
在策略上，图1中的“多克隆位点”包含了多种、多个识别序列，请说出设计这种“多克隆位点”的目的：________。
3．LacZ基因可以使细菌在含有X－gttl（5－溴－4－氯－3－吲哚－B－D－半乳糖）底物和IPTG（一种乳糖类似物）的培养基上形成蓝色的菌落，即X－gal被lacZ基因编码产生的鼻半乳糖昔酶水解成蓝色；若要形成重组质粒，则在含X－gal的培养基上将形成白色菌落（而不是蓝色的）。
请据图2分析下列问题：
①用本无PUC118的大肠杆菌作为受体细胞，将培养瓶C中被连接处理后的DNA混合物倾入含X－gal、IPTG和________的D培养基平板上，其目的是________。
菌落生长结果图2中所示。
②过程V进行转移培养，则该应该挑选X、Y、Z中的________菌落进行液体培养。形成该颜色的生理原因是________。如此目的基因便被克隆了！
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