Question

19．回答有关基因工程的问题．
普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如图所示．已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．请回答问题：

（1）构建重组质粒时，应选用的限制酶是salⅠ、HindⅢ酶，然后对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证它们定向连接．
（2）质粒的基本单位是脱氧核苷酸．
（3）切割后的目的基因与质粒由DNA连接酶连接成重组质粒．筛选导入重组质粒的细菌，应在培养基中加入氨苄青霉素，
理由是因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，在添加青霉素的培养基中可以存活．
（4）若质粒被某一限制酶识别的序列是一GAATTC一，并在G与A之间切割．请画出被切割后所形成的黏性末端．
．

Answer 1

分析 分析题图：含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，但BamHⅠ酶切位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割；质粒含有抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因，但重组质粒只含氨苄青霉素抗性基因．

解答 解：（1）分析题图可知，构建重组质粒时，应选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割，这样会形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、质粒的自身连接，以保证目的基因和质粒的定向连接．
（2）质粒的化学本质为小型环状DNA，因此其基本单位为脱氧核苷酸．
（3）DNA连接酶可将切割后的目的基因与质粒连接成重组质粒．根据图中信息可知重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，但四环素基因已被限制酶破坏，所以在筛选导入重组质粒的细菌时，应在培养基中加入氨苄青霉素．
（4）在该工程中限制酶能识别的序列和切点是一G^↓GATCC一，则质粒被切割形成的黏性末端为．
故答案为：
（1）salⅠ、HindⅢ酶          含抗盐基因的DNA
（2）脱氧核苷酸
（3）DNA连接   氨苄青霉素  因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，在添加青霉素的培养基中可以存活
（4）

点评 本题结合题图考查基因工程的相关知识，特别是基因表达载体的构建过程，要求考生明确该步骤需要限制酶和DNA连接酶，至于需要哪种或哪几种限制酶，需要考生分析题图，选择的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，但不能破坏目的基因．