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    6．科学家利用生物工程技术，探究猪骨形态发生蛋白15（bmP15）基因具有表达特异性和示踪干细胞诱导分化为类卵母细胞的潜能．通过扩增猪bmP15基因的启动子片段与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因构建表达载体，该工程技术基本流程如图．请回答下列问题：

    （1）利用PCR技术扩增bmP15基因的启动子片段的前提，是要有一段已知核苷酸序列，以便合成引物．
    （2）过程①中，应先用限制酶XhoⅠ和HindⅢ处理表达载体1，以便插入bmP15基因的启动子构建表达载体2．
    （3）过程②中，常采用显微注射技术将表达载体2成功导入受体细胞．
    （4）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素，以防污染；还需通入一定浓度的C02，目的是维持培养液的pH．
    （5）在实验结果的基础上，利用标记的EGFP基因作探针，与猪羊水干细胞的mRNA进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因．
    （6）实验说明，bmP15基因启动子调控下EGFP基因在猪卵巢细胞细胞表达．

    分析 基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．基因工程的工具有：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体．将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射技术．抗生素能够消灭细菌等微生物．细胞中的基因选择性表达．

    解答 解：（1）PCR技术可以在短时间内体外大量扩增DNA分子．前提是要有一段已知核苷酸序列，以便合成引物．
    （2）据图示可知，切割目的基因时使用的限制酶XhoⅠ和HindⅢ，构建基因表达载体时，需用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，因此过程①中，需利用XhoⅠ和HindⅢ限制酶处理表达载体1．
    （3）将目的基因导入动物细胞的方法是显微注射技术．因此，过程②中常采用显微注射技术将表达载体2成功导入受体细胞．
    （4）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素，以防杂菌污染．动物细胞培养还需要气体环境，如需通入一定浓度的C02，目的是维持培养液的pH．
    （5）检测目的基因是否转录出了mRNA，使用分子杂交技术．因此为了进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因，可以提取上述猪肌肉细胞的mRNA利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交．
    （6）据实验结果，只有在猪卵巢细胞中检测出绿色荧光，而猪肌肉细胞核猪羊水干细胞中均没有检测出绿色荧光，因此推测猪bmp15基因在猪卵巢细胞特异性表达．
    故答案为：
    （1）PCR     引物
    （2）XhoⅠ和HindⅢ
    （3）显微注射
    （4）抗生素       维持培养液的pH
    （5）EGFP
    （6）猪卵巢细胞

    点评 本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或的能力，难度适中．

    练习册系列答案
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    19．如图为某家族甲、乙两种遗传病的系谱图．甲遗传由一对等位基因（A、a）控制，乙遗传病由另一对等位基因（B、b）控制，这两对等位基因独立遗传．已知Ⅲ4携带甲遗传病的致病基因，但不携带乙遗传病的致病基因．请回答下列问题：

    （1）甲遗传病致病基因位于常染色体上，乙遗传病致病基因位于X染色体上．
    （2）Ⅱ2的基因型为AaXBXb，Ⅲ3的基因型为AAXBXb或AaXBXb．
    （3）若Ⅲ3和Ⅲ4再生一个孩子，为同时患甲、乙两种遗传病男孩的概率是$\frac{1}{24}$．
    （4）若Ⅳ1与一个正常男性结婚，则他们生一个患乙遗传病男孩的概率是$\frac{1}{8}$．

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    A．B．C．D．

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    14．如图为处于减数分裂中的二倍体动物细胞，下列叙述错误的是（　　）
    A．此细胞处于减数第二次分裂的后期B．此动物的体细胞含有4条染色体
    C．此细胞为次级精母细胞D．此细胞中无同源染色体

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    1．下列有关细胞生命历程的叙述中，正确的是（　　）
    A．当一个细胞内合成出酪氨酸酶，意味着这个细胞发生了分化
    B．当一个细胞内不能合成酪氨酸酶，意味着这个细胞发生了突变
    C．当皮肤黑色素细胞衰老时，细胞内酪氨酸酶基因的数量减少
    D．当皮肤黑色素细胞发生癌变时，由于膜上的糖蛋白减少而无限增殖

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    11．奶酷生产中的凝乳酶是一种分泌蛋白．研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌．请结合如图回答：
    （1）利用PCR技术扩增目的基因原理与细胞内DNA复制类似（如图1所示）．图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础．从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为$\frac{15}{16}$．PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含ATP和Mg2+）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶．
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    18．如图中的1～6依次与各选项的内容相对应，其中包含关系错误的是（　　）
    A．细胞中的脂质：脂肪、磷脂、固醇、胆固醇、性激素
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