[题目]内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽.内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应.ETA是内皮素的主要受体.科研人员试图通过构建表达载体.实现ETA基因在细胞中高效表达.为后期ETA的体外研究奠定基础.其过程如下(图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因.限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG.限制酶XhoⅠ的识别序列为C� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究奠定基础。其过程如下（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG）。请分析回答：

（1）完成过程①需要的酶是____________；

（2）过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使__________键断开，形成的黏性末端是__________________。用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是____________________。

（3）过程④中需要酶，去构建重组质粒。过程⑥中，要用__________预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界的DNA。

（4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是_____________。

（5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释原因：______抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成。

【答案】（1）逆转录酶

（2）磷酸二酯 —AGCT（或—C—GAGCT）可以使目的基因定向连接到载体上

（3）DNA连接酶 Ca2+（或CaCl2）

（4）检测ETA基因能否表达及表达量

（5）ETA能与内皮素结合,减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合

【解析】（1）图中过程①是逆转录，需要逆转录酶的催化。

（2）限制酶能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定脱氧核苷酸之间切断磷酸二酯键；根据题意可知限制酶XhoⅠ切割DNA形成的黏性末端是—AGCT（或—C

—GAGCT）；用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是可以使目的基因定向连接到载体上（或防止含目的基因的外源DNA片段和质粒自身环化）。

（3）过程④是将目的基因与质量连接构建基因表达载体，需要DNA连接酶催化；过程⑥中，要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态的细胞。

（4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，可以检测ETA基因能否表达及表达量。

（5）注射的ETA能与内皮素结合,减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合，抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成，从而达到美容的目的。

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