Question

5．图是获得人乳铁蛋白的技术路线．（图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI三种限制酶的酶切位点如图所示）

据图回答：
（1）据图分析，过程①表示基因表达载体的构建，该过程需要的限制酶是Hind和BamH．筛选含有重组载体的大肠杆菌，培养基中应另添加氨苄青霉素．
（2）图中过程②最常用的方法是显微注射法．体外培养受精卵时，需将其置于含95% 空气加5% CO₂的混合气体的培养箱中进行培养，C0₂的主要作用是维持培养液的pH．
（3）图中过程④（填序号）表示胚胎移植，在胚胎移植前要对代孕牛进行同期发情处理．
（4）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术．

Answer 1

分析 分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程②是将重组质粒导入受体细胞；过程④需采用胚胎移植技术

解答 解：（1）过程①是基因表达载体的构建．外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．
（2）过程②是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．5%CO₂的混合气体的培养箱中进行培养，C0₂的主要作用是维持培养液的PH．
（3）过程④需要采用胚胎移植技术；在胚胎移植前要对代孕牛进行同期发情处理，使其处于相同的生理基础．
（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建   Hind和BamH   氨苄青霉素
（2）显微注射法    维持培养液的pH
（3）④同期发情
（4）抗原-抗体杂交

点评 本题结合乳腺生物反应器培育过程图和曲线图，考查基因工程、胚胎工程、基因频率的变化及生物进化等知识，要求考生识记基因工程的工具和操作步骤，能准确判断图中各过程的名称或采用的技术；识记胚胎分割技术的理论基础，能提取图中有效信息答题．