Question

【题目】内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系．内皮素（ET）主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ETA）结合而发挥生物学效应．科研人员通过构建表达载体，实现ETA基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaI的识别序列为，限制酶XhoI的识别序列为 ．请据图分析回答：

（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、脱氧核苷酸和 酶等．完成过程①②③的目的是 ．

（2）过程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使 键断开，形成的黏性末端是 ．用两种限制酶切割获得不同的黏性末端，其主要目的是 _．

（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是 的部位，进而可驱动基因的转录．除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是 ．

（4）过程⑥要CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的 细胞．

（5）将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测 ．

（6）基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中，不仅能有效改良植物的品质．还由于叶绿体转基因不会随 （“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而在一定程度上避免转基因作物中的外源基因能扩散到其他同类作物．

Answer 1

【答案】（1）逆转录酶 获取目的基因（ETA基因）

（2）磷酸二酯键 使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化

（3）RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录 复制原点、终止子

（4）感受态

（5）检测ETA基因能否表达及表达量

（6）花粉

【解析】

试题分析：（1）过程①以mRNA合成目的基因，所以需要加入缓冲液、原料、逆转录酶和ATP和引物等．过程①②③表示反转录法获得目的基因的过程．

（2）过程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．图中显示利用了两种限制酶切割目的基因和载体，从而获得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化．

（3）目的基因上游的启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有复制原点、终止子等结构．

（4）过程⑥中，要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态的细胞．

（5）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是检测ETA基因能否表达及表达量．

（6）基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中，不仅能有效改良植物的品质．还由于叶绿体转基因不会随花粉传给后代，从而在一定程度上避免转基因作物中的外源基因能扩散到其他同类作物．

故答案为：（1）逆转录酶 获取目的基因（ETA基因）

（2）磷酸二酯键 使目的基因定向连接到载体上，以防止目的基因自身环化

（3）RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录 复制原点、终止子

（4）感受态

（5）检测ETA基因能否表达及表达量

（6）花粉