Question

3．Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图．请回答：

（1）在上皮细胞进行培养时，应使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将细胞分散开制成细胞悬液，培养基的成分除无机盐、糖、氨基酸、核苷酸微量元素等营养成分外通常还需要加入血清、血浆．为了防止培养过程中的污染，细胞培养液中需添加一定量的抗生素；为了便于清除代谢产物，防止细胞产物的积累对细胞自身造成危害，应定期更换培养液．
（2）核移植的受体卵母细胞应培养至MII中期，此时应先去除卵母细胞的细胞核．
（3）ES细胞可由囊胚的内细胞团分离培养获得，它的功能特点是发育的全能性，人类可以对其进行诱导分化形成造血干细胞．
（4）基因导入之前必须构建基因表达载体，基因表达载体的组成要有目的基因、启动子和终止子、标记基因等．
（5）该治疗方式属于体外（体内、体外）基因治疗．

Answer 1

分析 1、动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体．
2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）．
3、在基因工程中，目的基因和质粒需要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接成重组质粒．
4、目的基因分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术
②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术
分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的流程，其中①表示获得重组胚胎的过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）在利用上皮细胞进行细胞培养时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，以消化组织细胞间的蛋白质，得到单个细胞．营养物质除了糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素．为了便于清除代谢产物，防止细胞产物的积累对细胞自身造成危害，应定期更换培养液．
（2）动物体细胞核移植的受体细胞是处于减数第二次分裂中期（MII中期）的卵母细胞，且要去除其细胞核．
（3）重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团中分离出ES细胞．ES细胞具有发育的全能性，人类可以对其进行诱导分化形成造血干细胞．
（4）基因表达载体由启动子、终止子、标记基因和目的基因组成．
（5）根据图形分析可知该治疗方式属于体外基因治疗．
故答案为：
（1）胰蛋白酶或胶原蛋白酶  血清、血浆    抗生素  培养液
（2）MII中   细胞核
（3）内细胞团  发育的全能性   诱导分化
（4）标记基因   启动子   体外

点评 本题结合利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的流程图，综合考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记细胞工程的操作步骤及相关细节；识记核移植技术的过程及应用；识记胚胎干细胞的来源及特点，能结合所学的知识准确答题．