[题目]为了培育新品种,研究者从其他植物中获取基因C(图1),拟将其与质粒(图2)重组,再去转化棉花细胞和小鼠细胞.回答下列问题:(1)构建含C基因的表达载体时,需选择图2中的限制酶切割质粒.构建基因表达载体的目的是 .(2)在条件下.将被C基因转化的棉花细胞培养在人工配制的培养基上.给予适宜的条件.诱导其产生愈伤组织.丛芽.最终形� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】为了培育新品种,研究者从其他植物中获取基因C(图1),拟将其与质粒(图2)重组,再去转化棉花细胞和小鼠细胞。回答下列问题：

（1）构建含C基因的表达载体时,需选择图2中的____________限制酶切割质粒。构建基因表达载体的目的是__________________________________________。

（2）在_______________条件下，将被C基因转化的棉花细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。人工配制的培养基中必须有一定的营养和激素，实验过程中发现部分接种在无激素培养基上的芽也能长根,其原因是__________________________________________。

（3）若将被C基因转化的小鼠细胞进行细胞培养，在传代培养时常用______________分散细胞，该过程中不能用胃蛋白酶代替，原因是________________________________。

【答案】EcoRⅠ 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用无菌和人工控制芽顶端合成的生长素向基部运输,促进根的分化胰蛋白质酶细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，所以用胃蛋白酶不行

【解析】

基因工程的操作步骤：获取目的基因（基因文库、PCR、人工合成）；构建基因表达载体（含标记基因、启动子、终止子、目的基因、复制原点等）；把目的基因导入受体细胞（显微注射法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、钙离子处理法）；目的基因的检测和鉴定（分子水平和个体水平检测，前者包括DNA分子杂交、分子杂交和抗原抗体杂交；后者如抗虫抗病接种实验）。

（1）根据目的基因的两端存在EcoRⅠ酶切位点可知，应该选择EcoRⅠ对质粒和目的基因进行切割，进而构建基因表达载体。构建基因表达载体可以使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）要被C基因转化的棉花细胞培养成完整植株，需要经过植物组织培养，该过程需要在离体、无菌、人工控制的条件下进行。芽顶端合成的生长素向基部运输，促进根的分化，故部分接种在无激素培养基上的芽也能长根。

（3）可以用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对动物细胞进行分散培养，由于细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，所以不能用胃蛋白酶分散细胞。

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