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    8．下面是从土壤中分离与计数自生固氮菌的实验，完成下列问题：
    实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多．将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养．在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖．
    材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱．
    （1）方法步骤：
    ①倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在酒精灯火焰旁操作．
    ②制备土壤稀释液
    ③涂布：按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个．
    ④培养：放入恒温箱内，在28℃～30℃下培养3d～4d．
    ⑤细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数．如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌株数是5×107．（稀释度是105）
    （2）预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数多于（选填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目．原因是无氮培养基上只有自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上大多数菌类都能生长．

    分析 微生物培养的关键是无菌操作，是由的接种过程都应该在酒精灯火焰旁进行．为避免实验误差，保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值．

    解答 解：（1）①在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌污染．
    ③为了避免实验误差，保证结果准确，一般设置3～5个平板，空白对照组需要牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个．
    ⑤选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值．如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌落数为（50÷0.1）×105=5×107．
    （2）肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合其他细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多．
    故答案为：
    （1）酒精灯火焰    3   1   30～300   5×107
    （2）多于    无氮培养基上只有自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上大多数菌类都能生长

    点评 本题通过探究实验的过程考查微生物的培养、分离和计数等知识点．

    练习册系列答案
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    C．曲线bc段与曲线de段血糖下降的原因相同
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    A．$\frac{1}{4}$B．$\frac{1}{2}$C．$\frac{1}{3}$D．$\frac{2}{3}$

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    C．有$\frac{1}{2}$的葡萄糖以无氧呼吸的方式分解
    D．有$\frac{2}{3}$的葡萄糖以无氧呼吸的方式分解

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    请根据上述材料回答下列问题：
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    （2）用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、目的基因、标记基因等部分．
    （3）cDNA属于部分基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过逆转录产生cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中．
    （4）PCR是一项利用DNA复制的原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术．其基本过程是：加热至90～95℃使双链DNA解链→冷却至55～60℃使引物结合到互补DNA链→加热至70～75℃使Taq聚合酶从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行．

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