Question

【题目】转基因水稻“金色大米”可以帮助人们补充每天必需的维生素A．由于含有可以生成维生素A的β﹣胡萝卜素，呈现金黄色泽，故称“金色大米”． 培育流程如下，请据图回答：
（已知限制酶I的识别序列和切点是 ；限制酶II的识别序列和切点是 ）
（1）图中a、b所示获得目的基因的方法是 ． 培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是 ．
（2）据图分析，在构建c的过程中，目的基因用进行了切割．检验c导入能否成功需要利用作为标记基因．
（3）与转入水稻不同，将c导入番茄细胞常用的方法是 ， 该方法依据的原理是番茄叶片受损后分泌的化合物的趋化性．检测转化成功的番茄植株，可采用技术检测目的基因在番茄体内是否成功翻译．
（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含β﹣胡萝卜素量更高、效果更好，则需要通过工程手段对合成β﹣胡萝卜素的相关目的基因进行设计．

Answer 1

【答案】
（1）反转录法；基因表达载体的构建
（2）限制酶Ⅱ；基因I
（3）农杆菌转化法；酚类；抗原﹣抗体杂交
（4）蛋白质
【解析】解：（1）图中a表示转录过程，b表示逆转录，因此可以看出图中a、b所示表示通过逆转录法获得目的基因．（2）据图分析，目的基因的两侧有﹣GGATCC﹣、﹣GATC﹣两种序列，由于酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一酶II的识别序列和切点是一↓GATC﹣，因此只能选择限制酶Ⅱ获取目的基因．图中可以看出目的基因插入到基因Ⅱ中，因此检验重组载体导入能否成功，需要利用基因I作为标记基因．（3）与转入水稻不同，将基因表达载体导入番茄细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法依据的原理是番茄叶片受损后分泌的酚类化合物的趋化性．检测转化成功的番茄植株，可采用抗原﹣抗体杂交技术检测目的基因在番茄体内是否成功翻译．（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过蛋白质工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计．该工程是一项难度很大的工程，因为蛋白质的高级结构十分复杂，目前对很多蛋白质的高级结构还不了解，所以目前成功的例子不多． 所以答案是：（1）反转录法 基因表达载体的构建（2）限制酶Ⅱ 基因I（3）农杆菌转化法 酚类 抗原﹣抗体杂交（4）蛋白质
【考点精析】解答此题的关键在于理解基因工程的原理及技术的相关知识，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．