Question

【题目】2，4，6-三氯酚主要通过农药施放、污水灌溉进入土壤造成环境污染，对人类有很强的致畸、致癌和致突变作用。由于氯代酚类物具有很强的毒性，所以对于被2，4，6-三氯酚污染的土壤仅利用土著微生物进行降解非常困难。常采用投加具有高效降解此类有机物的菌种以强化和补充土著微生物数量不足的问题。

（1）为获得高效降解菌，某科研机构选取适量农田土壤，加以_______________为唯一碳源进行为期4个月的菌种培养和驯化。驯化期间，每周需要轻轻翻动一次土壤，其目的是_______________________________________。

（2）驯化结束后，将菌种土壤加___________配制成土壤溶液，合理处理后加入配制好的选择培养基中，37℃条件下培养7d，再将培养基中菌落在无菌条件下用接种环挑取至50 mL的_______培养基中（按物理性质分类）进行选择培养，选择培养的目的是__________________。

（3）为解决因为外界环境因素（如湿度、光照等）使菌种无法发挥降解作用的难题。科研机构做了以下操作：

①取少量菌液，加入2．5％的海藻酸钠溶液，将菌液与海藻酸钠溶液按体积比1：3配制成混合液。

②充分混匀后，用注射针头吸取混合液滴入一定质量分数为4％的______溶液中，形成半透明小球。

③取出后用甘露醇溶液冲洗两次后保存于灭菌袋中，备用。

（4）上述技术是_____________，该技术既可以使高效降解菌保持活性，反复使用，又能提高微生物的催化活性和污染物降解速率。如果所使用的海藻酸钠浓度过高，则会导致__________。

Answer 1

【答案】2，4，6-三氯酚 补充氧气，同时让培养的微生物充分接触营养物质 无菌水 液体 增加2，4，6-三氯酚降解菌浓度，以确保能够从样品中分离到所需的菌种 CaCl2 固定化细胞技术 难形成半透明小球

【解析】

由题可知2，4，6-三氯酚降解菌分离主要步骤：土壤取样（富含2，4，6-三氯酚土壤）→选择培养（增大降解菌含量）→涂布培养（鉴别）→纯化培养（分离出降解菌）。固定化细胞技术是利用物理或化学的方法将细胞固定在一定空间内的技术。

（1）投放具有高效降解2，4，6-三氯酚的菌种，应以2，4，6-三氯酚为唯一碳源。定期翻动土壤的目的是补充氧气，同时让微生物充分接触营养物质。

（2）菌种土壤加无菌水配制成土壤溶液；50mL的培养基为液体培养基，选择培培养目的是增加2，4，6-三氯酚降解菌浓度，以确保能够从样品中分离到所需的菌种。

（3）用注射针头吸取混合液滴入4%的CaCl2溶液使胶体聚沉，形成稳定的半透明小球。

（4）将菌种包埋在海藻酸钠中的技术是固定化细胞技术。如果所使用的海藻酸钠浓度过高，则容易出现拖尾状的凝胶珠，如果所使用的海藻酸钠浓度过低，则形成的半透明小球所包埋的菌种数量过少。