Question

【题目】凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。科研人员在实验室中利用初步获得的猪红细胞液体进行血红蛋白（相对分子质量约为64000）的提取、分离和鉴定实验，请回答下列问题：

（1）将初步获得的红细胞洗涤好后加入____________，经搅拌、离心、分层后分出血红蛋白溶液，再装入____________中12小时，即完成粗分离。

（2）粗分离的血红蛋白溶液中含有一些微蛋白（相对分子质量约为11800），这两种蛋白质通过凝胶时，____________（填“血红蛋白”或“微蛋白”）移动速度较快，原因是_____________________。

（3）在纯化洗脱血红蛋白时，需要加入____________（填“磷酸缓冲液”或“生理盐水”），理由是________________________。

（4）为鉴定血红蛋白的纯度，要利用电泳实现样品中各种分子的分离，常用的两种电泳方法是____________。

Answer 1

【答案】蒸馏水和甲苯 透析袋 血红蛋白 血红蛋白相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动， 路程较短，因此移动速度较快 磷酸缓冲液 保持体外溶液的pH与体内环境中的pH基本-致，维持蛋白质正常结构和功能（或让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其正常结构和功能） 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳

【解析】

血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

（1）血红蛋白样品处理及粗分离时，为了释放血红蛋白需要加入蒸馏水和40%甲苯，细胞破裂释放血红蛋白，然后离心分层出血红蛋白溶液，最后进行透析。

（2）凝胶实际上是一些微小的多孔球体，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。比较分子量，血红蛋白分子量大于微蛋白，所以血红蛋白移动速度较快。

（3）洗脱时需要加入磷酸缓冲液，主要是保持体外溶液的pH与体内环境中的pH基本一致，让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其正常结构和功能。

（4）为鉴定血红蛋白的纯度，要利用电泳实现样品中各种分子的分离，常用的两种电泳方法是：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。