Question

7.（14分）人外周血单核细胞能合成白细胞介素2（IL-2）。该蛋白为淋巴因子，可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，在酵母菌中表达出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技术流程如右图。请回答：

（1）从健康人外周血分离得到的单核细胞，应置于                            气体环境中，并在适宜温度和pH条件下培养48h。提取细胞总RNA，生成cDNA。图中PCR过程的模板是                        。

（2）表达载体1中的位点a应含有图中           酶的识别序列，才能成功构建表达载体2。

（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有          密码，才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白。

（4）白细胞介素在单核细胞内合成的直接模板是             ，在体液免疫过程中，白细胞介素可作用于受抗原刺激的B细胞，使B细胞增殖、分化，形成                细胞。

（5）将表达载体2导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后离心，取                

（上清液/菌体）进行产物鉴定。

Answer 1

【答案】

7.（14分）

（1）95%空气和5%CO₂        含有目的基因(IL-2基因)的cDNA    

（2）限制酶BglⅡ      

（3）终止

（4）mRNA       浆细胞和记忆细胞    

（5）上清液

【解析】(1) 从健康人外周血分离得到的单核细胞，应置于95%空气和5%CO₂气体环境中，并在适宜温度和pH条件下培养48h。图中PCR过程的模板是含有目的基因(IL-2基因)的cDNA。由mRNA到cDNA的过程是反转录过程。

(2)根据图解可知目的基因的两端分别是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的，同一限制酶切割才能形成相同的黏性末端，表达载体1中具有EcoRⅠ的识别位点，因此位点a应与限制酶BglⅡ的识别位点相同，才能成功构建表达载体2。

(3)mRNA中如果含有终止密码子，则会导致翻译终止，不能合成目的蛋白。

(4) 白细胞介素在单核细胞内合成的直接模板是mRNA ，在体液免疫过程中，白细胞介素可作用于受抗原刺激的B细胞，使B细胞增殖、分化，形成浆细胞和记忆细胞。

（5）检测蛋白质，可以利用蛋白质作为抗原，导致机体产生抗体进行检测，由于抗体具有专一性，因此抗原—抗体杂交技术可以迅速检测出酵母菌是否表达出IL－2－HSA融合蛋白，在培养液中培养一段时间后离心，取上清液进行产物鉴定。