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    阅读下图，其中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
    (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有______个游离的磷酸基团。
    (2)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________。
    (3)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_______酶。
    (4)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____________。
    (5)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
    (1)0、2
    (2)SmaⅠ会破坏质粒的抗药性基因外源DNA中的目的基因
    (3)DNA连接酶
    (4)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
    (5)蔗糖为唯一含碳营养物质
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    A．吡啶羧酸太少，为微生物生长提供的碳源和氮源不足

    B．吡啶羧酸加入水体后诱导微生物基因突变需要一定的时间

    C．吡啶羧酸诱导产生分解吡啶羧酸的酶需要一定的时间

    D．水体微生物群体中代谢产物的积累使酶活性降低

     

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