Question

【题目】如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点．已知目的基因的两端分别包括有EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点．据图回答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有：目的基因﹣载体连接物、、三种．图中ampR和tetR可以作为质粒表达载体的基因，其目的是为了鉴别 ．
（2）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是启动子，其合成的产物是 ．
（3）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 ．
（4）若用第一小问的3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验．之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 ．

Answer 1

【答案】
（1）载体﹣载体连接物；目的基因﹣目的基因连接物；标记；受体细胞中是否含有目的基因
（2）mRNA
（3）EcoRI和BamHI
（4）载体﹣载体连接物；目的基因﹣载体连接物、载体﹣载体连接物
【解析】解：（1）用EcoRI酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA连接酶，则可出现3种连接结果，即目的基因自身连接形成的连接物，载体自身连接形成的连接物和重组质粒，要通过筛选、纯化才能选出符合要求的DNA．图中ampR和tetR可以作为质粒表达载体的标记基因，其目的是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因．（2）载体自身形成的连接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四环素的特点，其他连接物中tetR基因被限制性内切酶破坏，不再具有抗四环素的特点；在整个操作过程中，ampR基因保持完整，载体（质粒）自身连接形成的连接物和目的基因﹣载体连接物（重组质粒）都具有抗青霉素的特性．（3）RNA聚合酶与相关基因的启动子结合，完成的是转录过程，转录的产物是mRNA．（4）若用第一小问的3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验．之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，由于构建基因表达载体时，四环素抗性基因被破坏，因此能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是载体﹣载体连接物；若接种到含青霉素的培养基中，由于青霉素抗性基因没有被破坏，因此能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是目的基因﹣载体连接物、载体﹣载体连接物． 所以答案是：（1）载体﹣载体连接物 目的基因﹣目的基因连接物 标记 受体细胞中是否含有目的基因（2）mRNA（3）EcoRI和BamHI（4）载体﹣载体连接物 目的基因﹣载体连接物、载体﹣载体连接物
【考点精析】根据题目的已知条件，利用基因工程的原理及技术的相关知识可以得到问题的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．