Question

12．人类有许多疾病是由细菌或病毒导致的．因此水在饮用前的检验是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列有关问题：
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为稀释涂布平板法，所用的培养基需要灭菌，其常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌．
（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？需要设置（对照组）为什么？因为需要判定培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）．
（3）如分别取0.1mL已稀释10³倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为5.6×10⁸个．
（4）已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24h．试管内有气泡生成的说明水样中有大肠杆菌．
（5）某致病病毒的遗传物质是DNA，但是病毒DNA极少，这时可以通过PCR技术扩增病毒DNA片段，然后进行检测．采用这种技术进行DNA扩增时，一定需要用到的酶是耐高温的DNA聚合酶．

Answer 1

分析 1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同梯度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上，进行培养，在稀释度足够高的菌液离，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而获得由单细胞繁殖而来的菌落．
2、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取至少三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数．

解答 解：（1）由题意知，检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种接种方法是稀释涂布平板法．
（2）用稀释涂布平板法统计样本菌落数时需要设置对照组，因为因为需要判断培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）．
（3）每升原水样中大肠杆菌数为：（55+56+57）÷3×10000×10³=5.6×10⁸个
（4）检测水样中是否含有大肠杆菌的方法是：通过无菌操作向试管内注入一定量待测水样．再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24h．若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌．
（5）扩增DNA一般运用PCR技术，由于PCR技术中运用高温解链，因此利用的DNA聚合酶是耐高温的DNA聚合酶．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法　高压蒸汽灭菌
（2）需要设置（对照组）　 因为需要判定培养基是否被杂菌污染（培养基灭菌是否合格）
（3）5.6×10⁸个
（4）通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24 h．试管内有气泡生成的说明水样中有大肠杆菌
（5）PCR　 耐高温的DNA聚合酶

点评 本题主要考查微生物实验室分离、PCR技术等相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能运用所学知识，对生物学问题作出准确的判断．