Question

4．利用葡萄汁生产的葡萄酒、葡萄醋深受市场欢迎，某校一生物实验小组尝试使用罐头瓶在常温（21±3℃）下制作葡萄酒．请回答
（1）开始时，向消过毒的罐头瓶中加入新鲜的葡萄汁作为酵母菌的液体培养基，培养基一般包括有水、碳源、氮原和无机盐．葡萄汁装入瓶中要留出大约$\frac{1}{3}$的空间．在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭．通气的目的是提高酵母菌的数量．在以后的过程中，每隔12小时左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧，这样做的目的是排出CO₂，
防止杂菌污染．
（2）从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌，常使用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法两种．若计数酵母菌活菌的个数，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300 之间、适于计数的平板．也可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；
（3）分离纯化出的酵母菌在-20℃长期保存，菌液中需要加入一定量的甘油（填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”）

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、果酒和果醋制作过程中的相关实验操作：
（1）材料的选择与处理：选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去枝梗．
（2）灭菌：①榨汁机要清洗干净，并晾干．②发酵装置要清洗干净，并用70%的酒精消毒．
（3）榨汁：将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁．
（4）发酵：①将葡萄汁装人发酵瓶，要留要大约$\frac{1}{3}$的空间，并封闭充气口．②制葡萄酒的过程中，将温度严格控制在18℃～25℃，时间控制在10～12d左右，可通过出料口对发酵的情况进行．及时的监测．
③制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30℃～35℃，时间控制在前7～8d左右，并注意适时通过充气口充气．

解答 解：（1）微生物分离与培养的培养基成分一般包括水、碳源、氮原和无机盐．葡萄汁装入瓶中要留出大约$\frac{1}{3}$的空间．在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭．通气的目的是让酵母菌进行有氧呼吸，从而大量繁殖，提高酵母菌的数量．在以后的过程中，酵母菌无氧呼吸会产生酒精和二氧化碳，为了排出CO₂，防止杂菌污染需要每隔12小时左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧．
（2）从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌，常使用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法两种．若计数酵母菌活菌的个数，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300 之间、适于计数的平板．也可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；
（3）分离纯化出的酵母菌在-20℃长期保存，菌液中需要加入一定量的甘油．
故答案为：
（1）水、碳源、氮原  提高酵母菌的数量  排出CO₂，防止杂菌污染
（2）平板划线法 稀释涂布平板法   30～300   血细胞计数板
（3）甘油

点评 本题考查果酒和果醋的制作、微生物的分离和培养，要求考生识记参与果酒和果醋制作的微生物及其代谢类型；识记接种微生物常用的两种方法，能结合所学的知识准确答题．