Question

9．图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ的酶切位点．下列有关叙述错误的是（　　）

• A． 如果用EcoRⅠ对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种
• B． 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRⅠ酶切点有1个
• C． 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理
• D． 一个图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团

Answer 1

分析 1、将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有（目的基因与目的基因 ）、（目的基因与载体）、（载体和载体）三种．若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化．
2、将目的基因导入微生物细胞．原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca²⁺处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程．

解答 解：A、如果用EcoRI对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物、目的基因和目的基因连接物三种，A正确；
B、若将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRⅠ酶切后再用DNA连接酶连接，则形成的重组DNA中，目的基因两端应各含1个EcoRⅠ酶切位点，B错误；
C、为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理，C正确；
D、一个图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团，D正确．
故选：B．

点评 本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或的能力．