Question

12．一种质粒和人的胰岛素基因存在的限制酶的酶切位点（用E₁表示）如图所示，a表示标记基因，b表示胰岛素基因．现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，然后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，最不可能出现的是（　　）

• A．
• B．
• C．
• D．

Answer 1

分析 1、下图表示图解表示基因表达载体（重组DNA）的构建过，a是质粒，d是目的基因，b是用限制酶切割质粒，c是用DNA连接酶连接目的基因和质粒．

2、根据本题图形分析：题目中的质粒有两个E₁的酶切位点．用E₁切割质粒后，得到a片段（抗性基因的片段）和带有黏性末端质粒．

解答 解：A、用E₁切割质粒后，得到a片段（抗性基因的片段）和带有黏性末端质粒，这两个DNA片段会重新连接在一起，A正确；
B、用E₁切割质粒后，得到a片段（抗性基因的片段）和带有黏性末端质粒，胰岛素基因的两端也有E₁的切割位点，切割后，也得到黏性末端，所以胰岛素基因和带有黏性末端质粒可以连接在一起，形成重组质粒，B正确；
C、根据B的分析，胰岛素基因和带有黏性末端质粒可以连接在一起，形成重组质粒，仍然有2个酶切位点，C中仅仅有一个酶切位点，C错误；
D、用E₁切割质粒后，得到a片段（抗性基因的片段）和带有黏性末端质粒，仅仅带有黏性末端质粒的黏性末端连接在一起，D正确．
故选：C．

点评 本题结合基因表达载体的构建过程图，理想的重组质粒是B选项的图形，但是在实际的操作过程中，因为都是相同的黏性末端，连接的情况有多种，要注意题干信息的把握．