Question

13．从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定．富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法．
（1）接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌处理．在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在无菌条件下进行．
（2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化．如培养纤维素分解菌的菌样应从富含纤维素环境中采集．
（3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为唯一碳源．
（4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是刚果红，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌．某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够）．
（5）如图是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（6）关于如图的操作方法和结果，叙述正确的是D．
A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰上进行
C．在5区域中才可以提取到所需菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌．

Answer 1

分析 （1）微生物培养的程序：a．器具的灭菌、b．培养基的配制、c．培养基的灭菌、倒平板、d．微生物接种、e．恒温箱中培养、f．菌种的保存；在培养的过程中一定要注意无菌操作．
（2）选择培养基：选择培养基是根据不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同而配制的．不同微生物对某些化学药品的抵抗力不同．利用这些特点，我们便可配制出适于某些微生物生长而抑制其他微生物的选择培养基，例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；根据对营养物质的特殊的需求，可以选择不同的微生物，比如尿素分解菌的氮源是尿素，纤维素分解菌的碳源是纤维素．
（3）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物．当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈．这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌．

解答 解：（1）微生物的培养最重要的程序之一就是防止杂菌的污染，防止杂菌的污染首先要对培养基进行灭菌处理，培养基灭菌的方式是高压蒸汽灭菌法；在微生物接种的操作中也要注意无菌操作．
（2）分离纤维素分解菌要从富含纤维素的环境中寻找，以纤维素为唯一碳源的培养基上进行选择，就可以分离到纤维素分解菌．
（3）以纤维素为唯一碳源的培养基属于选择培养基．
（4）刚果红可以和纤维结合形成红色复合物，纤维素分解菌将纤维素分解以后，红色复合物消失，会形成透明圈；纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够）．
（5）分析图解乐至，图是利用平板划线  法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（6）在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌　无菌
（2）富含纤维素
（3）选择    唯一碳源
（4）刚果红   透明圈　菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够）
（5）平板划线  
（6）D

点评 微生物的分离要根据微生物不同的嗜好，配制不同的培养基，有的根据营养物质的特殊的需求，比如尿素分解菌是氮源是尿素，纤维素分解菌的碳源是纤维素；有的根据环境的要求，比如葡萄球菌能够耐高浓度的盐溶液，可以在培养基中加入高浓度的氯化钠等，在复习的过程中注意总结．