Question

在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可导致土壤污染．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌是因为

 

，B步骤培养基的营养配方特点是：

 

．从物理性质、用途两方面来看，该培养基属于

 

．
（2）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到灭菌的效果．高温灭菌的原理是高温使微生物的

 

等物质发生

 

．

 

灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法．
（3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

 

（4）在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是

 

．
（5）土壤中生活着多种细菌，其中生物固氮菌能以空气中的氮气为氮源，因此D步骤固体培养基上形成的菌落中，有透明带菌落利用氮源是

 

，无透明带菌落是由

 

繁殖形成的，降解该除草剂的细菌应挑选

 

（有、无）透明带菌落．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养

专题：

分析：从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．本题主要考查土壤中微生物的分离与，根据土壤中微生物的分离的实验操作过程、无菌操作的相关知识入手解答．

解答： 解：（1）由于长期使用该除草剂的土壤中目的菌的数量多（密度大），所以应该在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌．据图分析，B的操作是平板划线，该培养基应该为选择培养基，即是以该除草剂为唯一氮源（在无氮培养基中添加该除草剂）．该培养基属于固体培养基．
（2）高温灭菌的原理是高温使微生物的蛋白质和核酸发生变性．湿热灭菌法最常用的是高压蒸汽灭菌．
（3）在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是（划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少），每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
（4）选择培养基中缺少大部分细菌可利用的氮源（多数细菌不能以该除草剂为氮源），所以在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长．
（5）能够利用该除草剂的微生物能够将培养基中的除草剂中的含氮物质分解利用而形成透明圈，故有透明带菌落利用氮源是该除草剂，无透明带的菌落是生物固氮菌繁殖形成的，分离培养时应该挑选有透明带菌落．
故答案为：
（1）长期使用该除草剂的土壤中目的菌的数量多（密度大）   以该除草剂为唯一氮源（在无氮培养基中添加该除草剂）  固体选择培养基
（2）蛋白质和核酸   变性   高压蒸汽
（3）（划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少），每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源（多数细菌不能以该除草剂为氮源）
（5）该除草剂   生物固氮菌   有

点评：解答此类题目的关键是对土壤中微生物的分离这个实验的熟练掌握，和在微生物实验中的无菌操作相关知识的熟练应用．