[题目]苯丙酮尿症是一种单基因遗传病.由于PKU某因突变导致患者尿液中含有大量苯丙酮酸.基因定点整合可替换特定某因用于该病治疗.即将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上.替换突变基因.简要过程如下图所示.请回答下列问题:注:图中neoR为新霉素抗性基因.HB1和HB2为小鼠胚胎干细胞染色体DNA上突变的PKU� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】苯丙酮尿症是一种单基因遗传病，由于PKU某因突变导致患者尿液中含有大量苯丙酮酸。基因定点整合可替换特定某因用于该病治疗，即将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因。简要过程如下图所示。请回答下列问题：

注：图中neoR为新霉素抗性基因，HB1和HB2为小鼠胚胎干细胞染色体DNA上突变的PKU基因两侧的一段DNA序列。

（1）构建重组载体时，需要根据_____________序列分别合成HB1'和HB2'，在二者之间除了插入正常的PKU基因和neoR基因以外，还必须含有_____________。此过程常用的工具酶有____________，neoR基因的作用是___________。

（2）可用________技术将重组载体导入小鼠胚胎干细胞，诱导相应区域互换，完成胚胎干细胞的基因改造。胚胎干细胞的特点有_________（答出两点即可）。

（3）现用完成基因改造后的胚胎干细胞进行个体生物学水平鉴定，写出鉴定思路、结果及结论：___________________________。

【答案】HB1和HB2的碱基启动于、终止子限制酶、DNA连接酶鉴定与筛选含有正常PKU基因的胚胎干细胞显微注射能大量增殖；具有发育的全能性；体积小、细胞核大、核仁明显；在体外培养条件下，可以增殖而不发生分化。将该胚胎干细胞培育成小鼠，检测小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因成功表达，基因治疗成功，反之，则不成功。

【解析】

结合题图可知，互换后的小鼠染色体DNA，与小鼠染色体DNA比较，HB1和HB2的碱基分别替换成了重组载体的HB1'和HB2'，并且增加了重组载体的neoR为新霉素抗性基因，原来突变的PKU基因，替换成了正常的PKU基因。

（1）据图分析，构建重组载体时，需要根据小鼠染色体DNA上HB1和HB2的碱基序列分别合成HB1'和HB2'，并且在二者之间除了插入正常的PKU基因和neoR基因以外，还必须含有启动子和终止子等组件。此过程常用的工具酶有限制酶、DNA连接酶，neoR基因可用来鉴定与筛选含有正常PKU基因的胚胎干细胞。

（2）可用显微注射技术将重组载体导入小鼠胚胎干细胞，诱导相应区域互换，完成胚胎干细胞的基因改造。胚胎干细胞的特点：能大量增殖；具有发育的全能性；体积小、细胞核大、核仁明显；在体外培养条件下，可以增殖而不发生分化。

（3）完成基因改造后的胚胎干细胞进行个体生物学水平鉴定思路、结果及结论：将该胚胎干细胞培育成小鼠，检测小鼠尿液中苯丙酮酸含量，若小鼠尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因成功表达，基因治疗成功，反之，则不成功。

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A.tRNA与相应氨基酸的结合及分离均需酶和能量

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回答下列问题：

（1）制作橙汁时常加入果胶酶，果胶酶能分解果胶来提高橙汁的___________（答出两点）。为回收溶液中的果胶酶一般采用___________法将酶固定（答出两种方法）。

（2）果园土壤中的脂环酸芽孢杆菌，需氧，耐热，生长温度35-80℃。橙汁生产过程中若感染此菌，会影响橙汁品质。为优化橙汁生产工艺，进行了下述研究。

[实验一：脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定]

实验步骤：

a配制K氏培养基：

b取果园土壤，制备土壤稀释液：

c将土壤稀释液接种在K氏培养基平板上，培养后获得单菌落。

d对获得的目的菌落进行筛选和鉴定。

①K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的是___________。

②将上述步骤c初步分离得到的目的菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min后，取0．1mL涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h。此操作的目的是___________。

A．用80℃水浴杀死杂菌和芽孢

B．用80℃水浴进一步筛选出耐热目的菌株

C．分离纯化目的菌株

D．给细菌补充新的营养物质

③用接种环将筛得的目的菌株插入到半固体K氏培养基中，如下左图。接种时为什么要靠近酒精灯火焰：___________。45℃培养4-5天后进行观察，能够判断是脂环酸芽孢杆菌生长的试管是___________。

[实验二：脂环酸芽孢杆菌控制方法的研究]

实验步骤：

a称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。

b将实验一得到的菌株原液适当稀释得到菌株稀释液。

c分别取不同浓度的抑菌液加入到K氏培养液中，再分别加入菌株稀释液形成菌悬液

（各试管中加入的同一种液体均为等量）。培养一段时间后，将上述菌悬液分别接种到K氏平板培养基上。

①实验二中，对照组的设置应该是：_____________________________。

②为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用哪种接种方法?_ ___________，为什么? ______________。

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（注：气孔导度越大，气孔开放程度越高）。回答下列问题：

光照强度	金鹰玉簪		黄金叶玉簪
光照强度	总叶面积	植株干重	总叶面积	植株干重
全光照	18.61	32.63	24.73	25.81
50%全光照	70.86	49.84	46.63	37.85
30%全光照	58.87	37.79	66.11	52.45
10%全光照	36. 15	30.92	52.44	29.53