Question

【题目】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后，含有_________个游离的磷酸基团。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____________________。

（2）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于________________________________________________。

（3）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_______________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

（4）下列有关限制酶的叙述正确的是__________________。

A．从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应

B．限制酶的活性受温度、pH的影响

C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列

D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小

若用限制酶A、B单独或联合切割一个5000bp（bp为碱基对）大小的线状DNA分子，相关实验及数据如下表。

	第一步水解	产物（bp）	第二步水解	产物（bp）
实验1	A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	200、1900
		1400		600、800
		1000		1000
		500		500
实验2	B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900、600
		1300		800、500
		1200		1000、200
实验3	A酶、B酶同时切割	1900、1000、800、600、500、200

（5）由单酶剪切的片段数可知，A酶和B酶的酶切位点分别为_______个和_______个。

（6）综合实验数据的分析，在下图中绘制出实验3的酶切图谱。

_______________

（每小格代表100bp）

Answer 1

【答案】2 SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 蔗糖为唯一含碳营养物质 ABC 3 2

【解析】

（1）由于质粒在切割前是一个环状DNA分子，当质粒被切割后形成了两个末端各有1个游离的磷酸基团，故共有2个游离的磷酸基团。质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图可知，标记基因和外源DNA目的基因中均含有SmaI酶切位点，都可以被SmaI酶破环，故不能使用该酶剪切质粒和含有目的基因的DNA。

（2）构建含目的基因的重组质粒A时，选用 BamhHI 和HindⅢ酶对外源DNA和质粒进行切割，这样使目的基因两端的黏性末端不同，可以防止含目的基因的外源DNA片段自身环化，同理，也可以防止质粒自身环化。

（3）丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌不能在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中生长，而导入重组质粒的丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，能在以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基中培养，所以可以将受体细胞用以蔗糖为唯一含碳营养物质的培养基培养，完成目的基因表达的初步检测。

（4）A、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，即催化的是一种水解反应，A正确；

B、限制性内切酶的活性受温度、pH的影响，在最适宜的温度和pH条件下，酶的活性最高；温度和pH偏高或偏低，酶的活性都会明显降低；在过酸、过碱或温度过高条件下酶会变性失活，而在低温条件下酶的活性降低，但不会失活，B正确；

C、一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键，说明酶专一性，C正确；

D、限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大，D错误。

故选ABC。

（5）分析表格中的数据可知，单独用A酶切割可以产生4个DNA片段，所以A酶的酶切位点有3个；单独用B酶切割可以产生3个DNA片段，所以B酶的酶切位点有2个，该线性DNA分子上含有3个A酶切割位点，含有2个B酶切割位点。

（6）经A酶切割后获得的2100bp片段，再用B酶切割后又产生200bp和1900bp两个片段，则B酶的切割位点如图1；经B酶切割后获得的2500bp片段，再用A酶切割后又产生1900bp和600bp两个片段，则A酶的切割位点如图2

根据表中数据结合以上分析可知，A酶和B酶的切割位点如下：