[题目][生物-选修3:现代生物科技专题]已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列.编码β-半乳糖苷酶的α肽.而宿主细胞含有IacZ+的突变基因.其产物无β-半乳糖苷酶活性.但遇α肽.可发生α-互补作用.产生有活性的酶.使培养基中的无色物质X-Gal分解.菌落呈蓝色,若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中.失去α-互补作用(注:宿主细� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】【生物-选修3：现代生物科技专题】已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列，编码β-半乳糖苷酶的α肽。而宿主细胞含有IacZ+的突变基因，其产物无β-半乳糖苷酶活性，但遇α肽，可发生α-互补作用，产生有活性的酶，使培养基中的无色物质X-Gal分解，菌落呈蓝色；若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中，失去α-互补作用（注：宿主细胞菌落为白色）。图甲为pUC质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，tctR为四环素抗性基因，P为启动子、T为终止子，ori为复制原点。图乙表示目的基因的两端分别有EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。为获得目的菌株，请分析回答下列问题：

（1）为快速筛选目的基因，应将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用酶切，酶切产物用进行连接后将得到的混合物直接导入受体菌中，培养受体菌有的未被转化（用A表示），有的被转化，被转化的菌株有三种（B含环化目的基因的菌株 C含质粒载体的菌株 D含插入了目的基因的重组质粒的菌株）。

（2）为筛选出插入了目的基因的菌株，需要将宿主细胞接种在含有的培养基中。

（3）在培养基中，不能生长的菌株为；产生蓝色菌落的菌株为；产生白色菌落的菌株为（请用（1）中的A、B、C、D字母作答）。

（4）基因工程中除质粒作为基因载体外，还可用动植物病毒和。

【答案】（除特殊标记外，每空2分，共15分）

（1）EcoRⅠ DNA连接酶

（2）（无色物质）X-Gal和四环素（3分，写不全0分）

（3）A、B C D

（4）λ噬菌体衍生物

【解析】（1）限制酶应同时能将目的基因和运载体切割，分析所给目的基因和运载体，应用EcoRI酶切，然后用DNA连接酶将目的基因和运载体进行连接，得到重组质粒后导入到受体菌种。

（2）因为运载体中含有四环素的抗性基因，所以应在含有四环素的培养基上。并且含有重组目的基因的宿主细胞不会使无色物质X-Gal分解，菌落呈白色，所以宿主细胞应放在无色物质X-Gal和四环素的培养基中。

（3）在培养基上不能生长的应为A和B，即没有抗性的。产生蓝色菌落的应为含质粒载体的菌株，即C，没有插入外源基因的载体。而插入含有外源目的基因的重组质粒应是白色的，即D。

（4）作为基因工程的运载体有质粒、动植物病毒和λ噬菌体衍生物。

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