Question

6．解磷微生物能分解有机磷，可降低水体富营养化程度．如图是从湖泊污泥中筛选解磷微生物的过程示意图，下表是分离纯化的结果．请回答下列问题：
记录项目：透明圈直径/菌落直径

菌落编号	1	2	3
48h	1.6	2.8	3.0
72h	2.2	1.2	5.0
96h	2.3	1.2	4.2

（1）培养基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及无菌卵黄液，其中卵黄主要提供有机磷．从土壤中富集解磷微生物时，应选用液体（填“固体”或“液体”）培养基．
（2）在倒平板前，应对玻璃器皿和培养基灭菌，灭菌方法是高压蒸汽灭菌．配制成10^-1浓度稀释液时，用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有9mL无菌水的试管中，并依次配制10^-2～10^-10的梯度稀释液．
（3）过程③为菌种分离纯化的过程，接种方法分别为平板划线法，平板分离法进行如下操作，排序最合理的是②①④①③②．

（4）分析菌种的分离纯化结果，应选择为3号菌落进行扩大生产，原因是透明圈大，解磷能力强（具有相对较大的透明圈，解磷能力强）．

Answer 1

分析 培养基的成分一般包括水、碳源、氮源及无机盐，对于自养型生物，一般不加碳源，因为能利用二氧化碳，对于固氮微生物，一般不加氮源，如圆褐固氮菌．
微生物的实验室培养中涉及无菌操作的技术，其中主要涉及消毒和灭菌的方法，消毒是使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部部分微生物不能杀灭芽孢和孢子，灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子，常用的消毒方法有煮沸消毒法、化学药剂消毒和巴氏消毒法，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的实验室培养的关键就是防止外来杂菌的入侵．
常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目．

解答 解：（1）培养基的成分主要有牛肉膏、蛋白胨、NaCl及无菌卵黄液，其中卵黄主要提供有机磷．从土壤中富集解磷微生物时，应选用液体培养基．
（2）灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，所以用高压蒸汽灭菌对玻璃器皿和培养基灭菌．由于依次配制10^-2～10^-10的梯度稀释液，所以配制成l0^-1浓度稀释液时，需要用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1mL，移入盛有9mL无菌水的试管中．
（3）过程②、③为菌种分离纯化的过程，接种方法分别为稀释涂布平板法和平板划线法．平板划线的操作的基本步骤是：（一）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞．（二）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面．（三）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连．（四）将平板倒置，放入培养箱中培养为分离纯化优良酵母菌品种．所以采用平板划线法进行如图操作排序最合理的是②①④①③②．
（4）根据题意和图表分析可知：3号菌落中的透明圈直径即菌落直径最大，说明解磷能力最强，所以分析菌种的分离纯化结果，应选择为3号菌落．
故答案为：
（1）卵黄     液体
（2）高压蒸汽灭菌      9
（3）平板划线法     ②①④①③②
（4）3      透明圈大，解磷能力强（具有相对较大的透明圈，解磷能力强）

点评 本题考查微生物的分离和培养等相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．