Question

【题目】肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：

（1）进行过程①时，需用相关酶切开载体以插入let-7基因，该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为___________，同时，重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。

（2）进行过程②时，当细胞生长到表面___________时，需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。

（3）研究发现，let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析，肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________含量减少引起的，作出该假设的依据是_________________________。

Answer 1

【答案】 磷酸二酯键 启动子 复制原点 标记基因 相互接触 胰蛋白（胶原蛋白） 分瓶 RAS蛋白 miRNA和RASmRNA互补配对，抑制了翻译过程;据图分析可知，RASmRNA和没有翻译功能的miRNA结合后能抑制RAS基因的翻译，所以细胞中RAS蛋白质的含量减少

【解析】试题分析：分析图1：图1表示利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞的流程，其中①表示基因表达载体的构建过程；②表示用胰蛋白酶处理组织细胞，使之成为单个细胞，再加细胞悬液进行细胞培养的过程；分析图2：图2表示let-7基因影响癌基因RAS的表达的原理，let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。

（1）过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制性核酸内切酶（简称限制酶）对载体进行切割，以便于目的基因的插入，该酶切割的是DNA分子中的磷酸二脂键。重组质粒上的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，复制原点可以启动质粒的自我复制，标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。

（2）过程②表示用胰蛋白酶处理组织细胞获得单个细胞的过程，当细胞生长到表面相互接触时，需用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行分瓶后继续培养。

（3）据图2可知，let-7基因影响RAS基因表达的机理是：let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制。