Question

19．内蒙古农业大学生命科学院成功培育出了转肠乳糖酶基因的“低乳糖奶牛”．这头奶牛所产牛奶中不含乳糖或含量很低．请回答下列问题：
（1）构建基因表达载体时，需要获取仅在（优良）奶牛乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低．构成启动子的基本单位是脱氧核苷酸．
（2）将基因表达载体导入奶牛受精卵细胞常用的方法是显微注射法，与早期胚胎细胞和体细胞相比较，受精卵细胞的优势是具有全能性，能直接发育成新个体．
（3）受精卵经过体外培养，形成桑椹胚或囊胚，再移植到受体母牛体内，移植到受体母牛子宫内的胚胎能够存活的原因是受体母畜对移入的外来胚胎不发生免疫排斥反应．
（4）进行胚胎移植操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用DNA分子杂交（或DNA探针）技术进行DNA分析，以鉴定其性别．人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原-抗体杂交进行检测，其中的抗原是指人的肠乳糖酶．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）由于细胞中基因选择性表达，所以在构建基因表达载体时，需要获取仅在优良奶牛乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，以使乳汁中的乳糖含量降低．由于启动子位于质粒DNA上，所以构成启动子的基本单位是脱氧核苷酸．
（2）将基因表达载体导入奶牛受精卵细胞常用的方法是显微注射法．与早期胚胎细胞和体细胞相比较，受精卵细胞的优势是具有全能性，能直接发育成新个体．
（3）受精卵经过体外培养，形成桑椹胚或囊胚，再移植到受体母牛体内，移植到受体母牛子宫内的胚胎能够存活的原因是受体母畜对移入的外来胚胎不发生免疫排斥反应．
（4）进行胚胎移植操作前，需要对取自早期胚胎的滋养层细胞利用DNA分子杂交（或DNA探针）技术进行DNA分析，以鉴定其性别．人的肠乳糖酶基因在奶牛中是否成功表达，可以采用抗原-抗体杂交进行检测，其中的抗原是指人的肠乳糖酶．
故答案为：
（1）（优良）奶牛乳腺    脱氧核苷酸
（2）显微注射法    具有全能性，能直接发育成新个体
（3）桑椹胚或囊胚      受体母畜对移入的外来胚胎不发生免疫排斥反应
（4）DNA分子杂交（或DNA探针）     人的肠乳糖酶

点评 本题考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的操作步骤及各步骤中需要注意的细节问题；识记胚胎移植的过程、对象及生理学基础，能结合所学的知识准确答题．