Question

14．自然界中的微生物往往是混杂生长的．人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定．下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题．
步骤：①制备稀释倍数为10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀释液．②用稀释涂布平板法接种样品．③适宜温度下培养．结果分析：
（1）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是D．
A．一个平板，统计的菌落数是23
B．两个平板，统计的菌落数分别是22和26，取平均值24
C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
（2）一同学在稀释倍数为10⁶的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL）1.17×10⁸．
（3）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落．
（4）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？不能 因为杂菌可能来自培养基或来自培养过程．

Answer 1

分析 1、平板划线法是接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的造作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，在数次划线之后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体-菌落；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同梯度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上，进行培养获得由单细胞繁殖而来的菌落．
2、对微生物进行分离、计数常用的接种方法是稀释涂布平板法，估算每毫升样品中的细菌数时，往往选取30～300的平板，取至少三个平板的平均值，每毫升样品中的细菌数=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数；由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此估算的菌落数少于实际菌落数．
3、微生物培养过程中要严格遵循无菌操作．

解答 解：（1）在对应稀释倍数为10的培养基中，分析选项可知，D选项中四个平板的每个平板的菌落数在30～300之间，且非常接近，因此D选项的结果最可靠．
（2）每毫升样品中的细菌数是=（平板的平均菌落数÷涂布的体积）×稀释的倍数=（23.4÷0.2）×10⁶=1.17×10⁸个．
（3）由于当两个或多个细胞连在一起时平板上观察的是一个菌落，因此实际菌落数多于估算的菌落数．
（4）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，不能确定大肠杆菌品系被污染，也可能是培养基被污染或接种过程没有严格按照无菌技术进行操作或培养过程污染．
故答案为：
（1）D　    
（2）1.17×10⁸
（3）多　当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落
（4）不能      因为杂菌可能来自培养基或来自培养过程

点评 本题的知识点是微生物培养过程，分离微生物和统计活菌数常用的常用方法，主要考查学生设计和完善实验步骤，分析实验结果获取结论的能力和提出问题进行进一步探究的能力，利用所学的微生物知识解决生活问题的能力．