Question

2．胰岛B细胞移植是一种有效治疗糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向诱导人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）分化成胰岛B细胞．请回答下列问题：

（1）取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用胰蛋白酶处理，去除细胞表面（糖）蛋白，使细胞分散开，最终制成hAMSCs悬液．将细胞悬液放入培养瓶中进行原代培养，先后出现细胞贴壁生长、接触抑制现象象，直至细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关处理，然后进行传代培养．
（2）取传至第3代的hAMSCs放入细胞培养板，同时加入RPE进行诱导分化培养．该代hAMSCs能保持细胞正常的（二倍体）核型．诱导分化培养15天后，提取细胞的RNA（或mRNA），用胰岛素基因探针进行分子杂交，可初步检测hAMSCs是否分化成胰岛B细胞．
（3）用人的杂交瘤细胞来生产人源单克隆抗体难以成功，因此单克隆抗体大都来自鼠源．但鼠源单抗在人体内使用，会产生较强的免疫原性，为解决这一问题，发明了嵌合抗体．大致过程如图所示，嵌合抗体能降低鼠源抗体的免疫原性，从图中可以推测，免疫原性的产生主要与抗体的C（选填“V区”、“C区”）有关．构建的人鼠嵌合抗体基因表达载体除了标记基因和目的基因外，还有启动子、终止子．
（4）科学家们用细胞融合实验证明，分化的细胞中存在“闲置不用”的结构基因．他们把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞，筛选出含有两套肝细胞染色体和一套成纤维细胞染色体的细胞．这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞3种特异蛋白的能力，也合成了小鼠干细胞的这3种蛋白，但是在正常的小鼠成纤维细胞中从不合成这些．由此可见，融合实验证明了小鼠成纤维细胞含有不表达的但肝细胞专一表达的基因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达．

Answer 1

分析 1、蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要．
2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．

解答 解：（1）取人羊膜组织刮除血块、上皮细胞，冲洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，去除细胞表面的糖蛋白，最终制成hAMSCs悬液．将细胞悬液放人培养瓶中进行原代培养，当细胞贴壁生长到一定阶段时，出现接触抑制现象，此时细胞停止分裂增殖，这时需要将细胞进行相关处理，然后进行传代培养．
（2）10代以内的细胞可以保持正常的二倍体核型，因此传至第 3 代的hAMSCs能保持细正常的（二倍体）核型．细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此要检测 hAMSCs 是否分化成胰岛 B 细胞，在诱导分化培养15天后，可提取细胞的RNA（或mRNA），用胰岛素基因探针进行分子杂交．
（3）从图中可以推测，免疫原性的生主要与抗体的C区有关．构建的人鼠嵌合抗体基因表达载体除了标记基因和目的基因外，还有启动子、终止子．
（4）把大鼠肝肿瘤细胞和小鼠成纤维细胞融合成杂交瘤细胞，这些细胞既保持了合成大鼠肝细胞3种特异蛋白的能力，也合成了小鼠肝细胞这3种蛋白，但是在正常的小鼠成纤中从不合成这些．由此可见，融合实验证明了小鼠成纤维细胞含有不表达的但肝细胞专一表达的基因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达．
故答案为：
（1）（糖）蛋白   细胞贴壁生长、接触抑制现象
（2）（二倍体）核型    RNA（或mRNA）
（3）C  启动子、终止子
（4）含有不表达的但肝细胞专一表达的基因，在特定条件下这些“闲置基因”也可表达

点评 本题结合图解，考查蛋白质工程、动物细胞培养等知识，要求考生识记蛋白工程的概念及过程；识记动物细胞培养的过程及条件，能结合图中信息准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．